摘要目的:研究同一恶性肿瘤的癌、癌旁、正常细胞的拉曼光谱与分子生物学变化之间的关系以及由正常组织→癌的发生发展过程中生物组分的变化与发病机理,以期建立癌细胞的特征拉曼光谱库。 方法:采取确诊为肝癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌病人手术后的新鲜标本,用机械分散法制备正常、癌旁及癌组织的单细胞悬液,按照慢冻快融的原则进行细胞的冻存与复苏,然后通过光镊拉曼光谱技术测出正常、癌旁及癌组织的单细胞拉曼光谱。将细胞悬液离心15分钟后,取上清液以同样的激发功率和曝光时间采集背景光谱。最后把细胞的拉曼光谱减去背景的光谱,最终得到单细胞的拉曼光谱。所得数据用origin6.0软件进行处理。结果:1.胃癌细胞的拉曼光谱的特征峰在883、1051、1089、1283cm-1,它们的相对强度改变与细胞内DNA含量、结构改变有关。胃癌的癌细胞与癌旁细胞、正常细胞在拉曼光谱的特征光谱带差异有显著意义(p<0.05)。2.结肠癌细胞的拉曼光谱的特征峰在1300、1350、1442、1458、1576、1662、1647和1739cm-1,它们的强度变化说明细胞中核酸含量增加,脂类的含量减少。结肠癌的癌细胞与癌旁细胞、正常细胞在拉曼光谱的特征光谱带差异有显著意义(p<0.05)。3.肝癌细胞的拉曼光谱特征峰在1040、1080、1182、1156、1241cm-1,它们的强度变化说明细胞中核酸含量增加,蛋白质的二级结构发生改变。肝癌的癌细胞与癌旁细胞在拉曼光谱的特征光谱带差异有显著意义(p<0.05)。因肝癌病人大多合并肝硬化,故肝正常细胞很难获得。4.乳腺癌细胞的拉曼光谱特征峰在782、979、1087、1155、1175cm-1,它们的强度改变说明细胞DNA的磷酸根骨架(主链)有一定的断裂,脂类含量有变化。乳腺癌的癌细胞与癌旁细胞、正常细胞在拉曼光谱的特征光谱带差异有显著意义(p<0.05)。5.在非特征性光谱带,胃癌、结肠癌、乳腺癌分别有不同例数的癌旁细胞与正常细胞的谱线差异无显著意义(P>0.05),这主要与所取标本的大小、恶性程度等有关。6.4种癌细胞的拉曼光谱的特征带及特征峰各不相同,两两比较差异有显著意义(p<0.05)。 结论:1.胃癌、结肠癌、乳腺癌病人的癌细胞与正常细胞相比,其拉曼光谱线在特征谱带发生明显变化。在非特征光谱带,有些癌旁细胞与正常细胞的谱线差异无显著意义,这主要与所取标本的大小、恶性程度等有关。2.肝癌病人的癌细胞与癌旁细胞相比,其拉曼光谱线在特征谱带发生明显变化。在非特征光谱带,有些癌细胞与癌旁细胞的谱线差异无显著意义,这可能与肿瘤包膜不完整,肝癌旁组织也受浸润有关,至于肝癌细胞与正常细胞、肝癌旁细胞与正常细胞的比较,有待条件许可而做进一步的探索。3.不同的癌细胞,其拉曼光谱线的特征带及特征峰有明显不同,有些部分重叠或位置相近,特征光谱带的范围有待进一步扩大。4.建立正常细胞与癌细胞的特征拉曼光谱库完全可能,单细胞光镊拉曼光谱技术有可能成为一条诊断肿瘤的新途径,具有非常广阔的前景。
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