摘要硝酸纤维素(NC)膜是最早商业化的微孔膜,近十几年来由于其对生物大分子物质的非特异吸附性能而被广泛应用于生化领域。 本论文分别采用直接浸入法、蒸汽诱导法以及干法制备了NC膜,初步探讨了它们的成膜机理,并考察了NC膜对蛋白质的吸附性能,具体研究内容如下:(1)分别以丙酮、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜为溶剂,采用直接浸入法制得NC膜,并考察了凝胶浴中溶剂含量对膜结构的影响。研究发现:铸膜液溶剂种类及溶剂与非溶剂的传质对膜结构有较大影响,其中以DMSO为溶剂的所获得的膜性能最好;在凝胶液中添加不同量的溶剂时,其膜结构变化规律也不同,当凝胶浴中的DMSO含量为30%时,其孔隙率最高,且表面的皮层消失。 (2)以丙酮为溶剂、甘油为添加剂,通过蒸汽诱导法获得具规则多边形胞状大孔结构的NC膜,并考察了铸膜液中甘油含量、蒸汽诱导时间及成膜环境湿度对膜结构的影响。研究发现:铸膜液中甘油含量和蒸汽诱导时间对膜结构有较明显的影响。改变成膜条件,可获得底面孔径为5-7μm不等,孔隙率较高的NC膜。 (3)以丙酮为溶剂,乙醇、异丙醇为非溶剂,并添加一定的非溶剂水通过干法制备NC微孔膜,研究了溶剂配比、含水量、成膜环境温度及湿度、涂膜厚度及分子量对膜结构及性能的影响。通过调节铸膜液中溶剂和非溶剂配比以及成膜环境条件,可获得孔径为0.6-17.8μm不等、结构均匀的网络状NC微孔膜。 (4)考查了NC膜对蛋白质的吸附机理,发现BSA-NC膜之间的吸附热为△H=-6.799KJ·mol-1,活化能为Ea=7.293KJ·mol-1,推断出其作用力可能是范德华力、疏水相互作用力及氢键力的共同作用而产生的;等温吸附研究发现BSA在NC膜上的吸附基本满足Langmuir吸附模型;等电点处蛋白质吸附量最大,且蛋白质吸附量随着离子强度的增加而增加,随着膜孔径的变大而减少,具有开口结构的胞状膜对BSA也有一定的吸附量。 (5)通过Western转印技术,将纯度为98%的重组别藻蓝蛋白(rAPC)转印到研制的NC膜上,制备成rAPC免疫亲和膜,利用抗体与抗原之间的特异性免疫反应,分别对兔抗APC多克隆抗血清进行分离纯化,获得的兔抗APC抗体的纯化吸附量为5.79mg/g膜;经SDS-PAGE分析,其抗体纯度均高于98%,为抗体的亲和纯化提供了一种高效的免疫分离用膜。
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