检索历史 清除

摘要野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(简称Xcc)是十字花科植物重要的病原细菌，能广泛的引起十字花科作物的黑腐病。Xcc侵染寄主植物的过程是非常复杂的，一般经过吸附-识别-侵入-繁殖-定殖-扩展-显症7个过程，而且每一个过程都有相应的基因参与；Daniels预测大约有20～100个基因参与Xcc的致病过程，而目前已经实验证实的致病相关基因大约有60多个。可是根据野油菜黄单胞菌野油菜致病变种8004菌株基因组数据，预测的致病相关基因有250多个。由此可见在该病原菌中，尚有许多未知的致病相关基因有待人们去鉴定。目前，寻找致病相关新基因的方法主要有3种：一是构建突变体的方法，该方法是通过构建病原菌基因组中每一个基因的突变体，然后进行致病性检测；二是基因差别表达的方法，该方法是通过GUS报告系统或通过DNA芯片杂交检测在丰富培养基中和寄主体内或模仿寄主体内环境条件的培养基的基因表达差异，一般将那些受寄主诱导的基因作为致病相关基因的候选基因；三是生物信息学分析法，该方法通过在病原菌基因组中寻找和已报道的其他病原菌的致病相关基因的同源基因作为该病原菌的致病相关基因的候选基因。本研究采用了第一和第三种方法进行Xcc致病相关新基因的鉴定。首先，在本实验已经构建了Xcc8004的Tn5gusA5插入突变体库并对所有突变体进行了致病性检测的前提下，我们利用标记置换(marker exchange)的方法对10个致病力下降的Tn5gusA5插入突变体重新构建突变体，证实2个与Xcc致病相关的插入位点，通过进一步的非极性突变体的构建及互补证明了hgiA和gpdA基因与该病原菌的致病相关。另外，通过检查Xcc8004基因组注释结果，我们发现Xcc中存在一个与植物病原菌欧文氏菌致病因子调控基因rsmA高度同源的基因-csrA，我们通过定点整合突变的方法获得了该基因的非极性突变体，致病性检测表明该突变体不能在寄主植物满身红萝卜上引起症状。