换一批摘要本研究于2004年7月至2006年4月在广东省农科院果树研究所重点实验室进行，以柑桔衰退病、碎叶病、裂皮病、黄龙病和溃疡病为研究对象，建立了分别检测这五种病害的RT-PCR体系，并探讨了多重RT-PCR检测方法，以期获得快速、准确检测柑桔病害的方法。获得的主要研究结果如下： 1.建立了柑桔衰退病、碎叶病的RT-PCR检测体系；并根据裂皮病为环状类病毒，GC含量达到59.5﹪，通过选用特异Taq酶和添加PCR增强剂来提高PCR扩增效率，建立了柑桔裂皮病的RT-PCR检测体系。 2.首次RT-PCR检测柑桔黄龙病和溃疡病，并筛选出能在同一退火温度下进行PCR扩增的各病害特异引物，实现了五种病害的同步化检测。 3.在柑桔黄龙病和衰退病RT-PCR检测体系的基础上，建立了同时检测这两种病害的二重RT-PCR检测体系。得出适合二重PCR体系的Taq酶浓度为0.05U/μl；dNTPs浓度为0.25mmol/L；Mg2+为1.5mmol/L；两引物的浓度为HLB0.30μmol/L、CTV0.15μmol/L；退火温度为63℃。 4.首次以oligo(dT)引物为反转录，运用PCR检测出具有ploy_(A)加尾的柑桔衰退病和碎叶病；发现不具有ploy_(A)加尾的柑桔裂皮病同样可以用oligo(dT)反转录的RT-PCR检测出，通过测序分析，其同源性在96﹪以上，并发现在CEV序列中有一个富含A的区段。在此基础上结合二重RT-PCR体系，进一步研究了同时检测CTV、CEV和CTLV的多重RT-PCR检测体系。
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2007-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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