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摘要本文研究了抗转铁蛋白受体单链抗体及其双价抗体(BsFv)的构建，表达及其与细胞结合的活性与特异性鉴定。 方法 1.通过酶切与亚克隆构建抗转铁蛋白受体单链抗体(scFv)； 2.以抗转铁蛋白受体scFv为模板，设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI，通过PCR方法扩增出两个scFv片段，将其连接，并克隆至原核表达载体pAB1，将其转化大肠杆菌TG1，挑取单克隆细菌进行扩增，提取质粒酶切、测序鉴定； 3.IPTG诱导单链抗体及其双价抗体表达，Ni-NTA层析柱纯化抗体，收集纯化产物经SDS-PAGE分析，Westernblot鉴定； 4.通过FCM测定纯化单链抗体及其双价抗体与细胞结合特异性与活性。 结果 1.随机挑选转化板上的菌落提取质粒，SfiI、NotI酶切后琼脂糖凝胶电泳鉴定，可见一条约750bp和1500bp的阳性条带，分别与单链抗体和双价抗体基因大小理论值符合。双价抗体测序结果与原单链抗体以及PCR引物比对正确。证明抗TfR单链抗体和双价抗体构建成功，并均已克隆至分泌性表达载体pAB1中； 2.IPTG诱导单链抗体及其双价抗体表达，可溶性蛋白纯化后经SDS-PAGE分析，Westernblot检测，可见约30KD和60KD大小的条带，分别与单链抗体和双价抗体理论值一致； 3.将纯化的单链抗体，双价抗体分别与K562，HepG2，静止外周血淋巴细胞进行结合，FCM检测与细胞结合的阳性率结果显示，双价抗体与K562结合的阳性率约60％左右，与HepG2结合的阳性率为23％左右，高于单链抗体，且单链抗体，双价抗体与静止外周血淋巴细胞结合阳性率基本一致。表明构建的抗转铁蛋白受体单链抗体与双价抗体均具有与K562及Hela细胞表面TfR结合的特异性，双价抗体亲合力较单链抗体有所提高。 结论 成功构建与表达抗TfR的单链抗体与双价抗体，并证明其具有与K562，HepG2细胞表面TfR结合的活性及特异性，双价抗体亲合力较单链抗体有所增强。为抗TfR的单链抗体与双价抗体用于细胞表面TfR与可溶性TfR的检测，以及靶向研究奠定了基础。