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摘要第一部分新生小鼠耳蜗血管纹边缘细胞的分离及原代培养 目的：建立稳定的新生小鼠耳蜗血管纹(StriaVascularis,SV)边缘细胞(MarginalCells,MCs)的体外培养体系，为研究边缘细胞的形态和功能提供良好的条件和模型。 方法：采用机械分离方法分离出新生小鼠的血管纹，将其接种于3.5cm培养皿中贴壁生长，加入含有10％胎牛血清、氢化可的松、表皮生长因子、三碘甲状腺原氨酸、胰岛素、转铁蛋白等促进生长成分的完全培养基，于37℃、5％CO2/95％空气的恒温培养箱内培养，观察细胞生长状况，每周换液二次。制作扫描电镜标本观察细胞的超微结构。结果：光镜下，接种24小时可见约80％移植块周围少量多角形细胞爬出。48小时，可见多角形细胞明显增多，细胞成片状离心性生长；梭形细胞在移植块另一侧散在生长。72小时后，更多的多角形细胞相互融合，形成紧密排列的单层极性上皮层，呈典型的“铺路石”样外观，梭形细胞在多角形细胞周围呈放射状生长。5天后，来源于多个移植块的多角形细胞团块融合，并出现“dome”现象。梭形细胞数量显著增加，并抑制多角形细胞层的增大。部分多角形细胞体积变大，呈“泡沫样”外观。20天左右，移植块逐渐变黑进而裂解消失。经过反复传代，细胞最长生长4周左右。电镜下见多角形细胞为一个或二个卵圆形核，有丰富的细胞器并有分泌小泡，可见微绒毛等上皮细胞特征。 结论：采用组织块培养方法，成功建立了小鼠血管纹边缘细胞的体外培养模型，为进一步研究内淋巴的形成机制提供了良好的条件。 第二部分改良小鼠耳蜗血管纹边缘细胞的原代培养及鉴定 目的：在改良取材方法的基础上建立更稳定、可靠的小鼠耳蜗血管纹边缘细胞的原代培养体系，为进一步利用边缘细胞进行生理学、免疫学、病理生理学、生物化学等方面的研究奠定基础。 方法：用机械分离和化学消化结合的方法制成细胞悬液，将其接种于3.5cm培养皿中贴壁生长，加入含有10％胎牛血清、氢化可的松、表皮生长因子、三碘甲状腺原氨酸、胰岛素、转铁蛋白等促进生长成分的完全培养基，于37℃、5％CO2/95％空气的恒温培养箱内培养，每日观察细胞生长状况，每周换液二次。用免疫细胞化学技术鉴定细胞的中间丝类型。用免疫荧光细胞化学技术鉴定细胞膜上的离子通道。 结果：光镜下，培养24小时至4天培养皿内细胞贴壁，未见明显增长。第5天，多角形细胞开始增多。第7天，在成片的梭形细胞区域内，多角形细胞呈单层极性排列，形成细胞岛，呈典型的“铺路石”样外观。第10天，可见“dome”形成。第14天后，2种细胞混杂生长，部分多角形细胞胞体增大，胞浆内空泡增多，呈“泡沫样”外观。细胞最长生长21天。免疫细胞化学染色显示多角形细胞共表达细胞角蛋白18和波形蛋白；梭形细胞仅表达波形蛋白。免疫荧光细胞化学技术进行胞膜上KCNQ1、NKCC1通道染色为阴性。 结论：采用改良边缘细胞培养方法，成功建立了小鼠血管纹边缘细胞的体外培养模型，经过免疫细胞化学鉴定证实，这一培养体系是稳定、可靠的。