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摘要昆白小鼠是我国最常用的实验动物之一，但已经建立的小鼠ES细胞系大多来源于129、C57BL/6J和BALB/C品系的小鼠，而用昆白小鼠建系的报道很少。因此建立昆白小鼠细胞ES系对我国深入而便利地开展干细胞的研究具有重要意义。 本研究从昆白小鼠胚胎中分离克隆出小鼠ES细胞，并对其进行了传代培养和鉴定，对影响小鼠ES细胞分离克隆的一些因素进行了探讨，目的在于筛选出更适合昆白小鼠ES细胞的分离克隆体系，为进一步建立昆白小鼠ES细胞系奠定基础，实验主要结果如下： 1.从446枚昆白小鼠胚胎中分离培养ES细胞，323枚ICM长出，ICM形成率为72.4％；并从72枚ICM中得到ES细胞，ES细胞的形成率为16.1％，最高所传代数为5代。 2.比较了不同的饲养层对昆白小鼠ES细胞分离克隆的影响：分别以MEF、STO、经丝裂霉素C处理后冷冻再解冻的STO和PEF作为饲养层；在这4种饲养层上，胚胎的孵化率和ICM形成率差异不显著；但在原代集落形成率和传代次数上差异显著(p＜0.05)：MEF的效果最好，STO、经丝裂霉素C处理后冷冻再解冻的STO次之，PEF最差。 3.利用BRL-CM作为培养液培养昆白小鼠的胚胎和ES细胞，胚胎可正常贴壁，ICM也可正常长出；将ICM分离接种有饲养层和无饲养层的条件中，只有条件培养基BRL-CM和饲养层相互结合时，才能促进昆白小鼠的ES细胞增殖并维持早期传代而保持不分化状态，这说明昆白小鼠ES细胞分离培养过程中，BRL-CM还不能完全替代饲养层的作用。 4.比较了不同的传代方法对昆白小鼠ES细胞分离克隆的影响：分别用0.25％的Trypsin-EDTA和2.4U/mL的Diapase作为消化液以酶消化法，用0.10％的Trypsin-EDTA和2.4U/mL的Diapase作为消化液以酶消化法+机械剥离来传代ES细胞；0.25％的Trypsin-EDTA对细胞的损伤较大，不适合昆白ES细胞的传代，其他3种方法均适合昆白ES细胞的传代。 5.对分离得到的ES细胞进行了AKP活性和体外分化能力鉴定，核型分析：AKP染色阳性，体外可自发分化成神经样细胞，将ES细胞离散成单细胞后，用不加LIF的培养液进行悬滴培养，得到了类胚体，说明所得到的ES细胞具有胚胎干细胞的典型特征；对其中的一株ES细胞核性分析，其核型为正常的XX型二倍体。