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β-榄香烯抗血管生成作用的实验研究

摘要背景与目的:β一榄香烯是从莪术中提取的有效抗肿瘤成分,在肿瘤治疗中获得了良好的效果。本研究通过观察β一榄香烯对血管内度细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用,检测其对血管内皮细胞碱性成纤维细胞生长因子受体mRNA表达的影响,探讨β一榄香烯抗血管生成作用的机制,并利用兔角膜移植瘤血管生成模型,检测β一榄香烯体内抗血管生成效应。 方法:MTT法检测β-榄香烯对EcV一3O4细胞的Ic<,50>值,利用PI染色进行流式细胞仪凋亡检测及细胞周期分析,电镜及DNA凝胶电泳观察不同浓度β-榄香烯作用后的改变。利用Annexinv~FITc/PI联合标记,行荧光相差显微镜观察及流式细胞仪早期凋亡分析。MTT法观察bFGF及β-榄香烯对EcV一3O4细胞增殖的影响;半定量RT—PcR检测β-榄香烯作用下EcV一3O4细胞bFGF受体mRNA表达的变化。裸鼠皮下种植人脑胶质瘤细胞系sHG44细胞,形成实体胶质瘤。将所得胶质瘤实体小块移植于兔角膜,建立角膜移植瘤血管生成模型。经兔耳缘静脉注射β一榄香烯,干预两周后应用Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色及图像分析技术,检测移植胶质瘤组织内微血管密度变化。 结果:MTT法检测显示β一榄香烯对EcV一304细胞有显著的增殖抑制作用,Ic<,50为(s8.3±8.1)μg/ml。流式细胞分析发现,β一榄香烯在60ug/ml即可明显地将细胞阻滞于Gα/G<,1>期(P<0.05),并可见到“亚G<,1>峰”。电镜观察到典型的凋亡细胞超微形态改变,DNA凝胶电泳则可见特征性的“梯形带”。30μg/ml β-榄香烯作用24h即可诱导ECV-304细胞早期凋亡,而大剂量(100 ug/ml)则引起现明显细胞毒作用。20ug/ml β一榄香烯可以抑制单纯由bFGF引起的ECV-304细胞增殖,并可以降低ECV-304细胞bFGF受体的mRNA表达。兔角膜移植瘤血管生成模型成功建立;β-榄香处理组移植胶质瘤微血管密度明显低于对照组。 结论:小剂量的β一榄香烯即可以诱导EVC-304血管内皮细胞发生早期凋亡。较小剂量的β一榄香烯就可以通过干扰细胞周期、诱导凋亡对EVC-304细胞产生明显的增殖抑制作用。β-榄香烯可以通过降低bFGF受体的mRNA表达影响ECV-304血管内皮细胞增殖活性。兔角膜血管生成模型是定量研究肿瘤血管生成的良好工具;β-榄香烯具有良好的体内抗肿瘤血管生成作用。

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