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用于血液四项指标检测的压电免疫传感器阵列的研制

摘要压电石英晶体免疫传感器是利用压电石英晶体振荡频率对表面质量负载的高度敏感性与免疫反应的高度特异性相结合发展起来的一种新型生物传感器。它具有灵敏度高、特异性好、操作简单,不需要任何标记;检测速度快,成本低廉等特点,有望成为临床实验诊断大规模应用的方法。 目前血液四项指标用ELISA法,大多数使用第二代或第三代检测试剂盒。两批试剂重复检测后确定结果。ELISA法耗时长,操作步骤多,对于弱阳性的血清易漏检。本论文以四个AT切9.8MHz压电石英晶体为换能器,制作了四通道石英晶体传感器阵列及振荡电路,将乙肝表面抗原单抗、丙肝基因工程抗原、梅毒多表位嵌合抗原、爱滋基因工程抗原作为特异性探针,利用共价交联法固定在石英晶体电极表面,并用牛血清白蛋白作为封阻剂,研制成用于血液中四项指标物的检测的压电免疫传感器阵列,建立了压电石英晶体生物传感器检测的技术平台。在生物敏感材料固定过程中,比较了三种固定方法的固定效果,并对聚乙烯亚胺法固定条件进行了优化。得到在石英晶体上滴加40g/L的聚乙烯亚胺后,和0.3m01/l的戊二醛在30℃下反应20min,戊二醛的活性提高。抗原抗体与戊二醛在37℃下反应60min,固定效果最佳。PH7.4和氯化钠浓度为0.05M对抗原抗体固定化有利。 可采用蛋白A法制备单通道压电乙肝表面抗原免疫传感器,抗体的固定浓度为0.5mg/ml。该传感器的灵敏度达到了0.01ng/m1。 用聚乙烯亚胺法制备压电传感器阵列固定乙肝表面抗体的最佳浓度lmg/ml。聚乙烯亚胺法固定梅毒、丙肝、爱滋抗原,抗原的最佳浓度分别为0.0Bmg/ml、0.05mg/ml、0.03mg/m1。该传感器阵列检测乙肝表面抗原的灵敏度为0.0l ng/m1。此传感器丙肝病毒抗体的检测下限为0.05NCU/ml。同样检测梅毒螺旋体抗体的下限为0.04NCU/ml、HIVl抗体的下限为0.01。NCU/ml。对质控血清检测时,传感器阵列对阴阳性血清的响应,以对阴性血清响应值为噪声,阳性血清的响应为信号,信噪比大于4。将其用于临床样品检测时,与ELISA法相关性好,因此可以将本传感器阵列用于血液四项指标的定性和定量检测,具有较好的应用前景。

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