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耐药性白假丝酵母菌主动外排泵基因过度表达与转录调控机制的研究

摘要目的研究白假丝酵母菌对唑类药物的耐药性与主动外排泵基因过度表达的关系,并初步探讨主动外排泵基因过度表达的转录调控机制。 方法①微量稀释法测定4种抗真菌药物对40株临床分离的白假丝酵母菌的最低抑菌浓度(MIC);②检测罗丹明6G在敏感和对氟康唑耐药的白假丝酵母菌中的外排情况,筛选出罗丹明6G外排明显增加的耐药菌株;③RT-PCR方法检测主动外排泵基因CDR1和CDR2的相对表达水平;④EMSA法检测与CDRl基因表达上调有关的转录调节因子与药物反应元件(drug response element,DRE)的结合活性。 结果①40株临床分离菌中,所有菌株对两性霉素B均敏感;对氟康唑耐药的有11株(MIC>32μg/ml),有2株对氟康唑产生药物依赖,其MIC值为:8<MIC<32μg/ml;对酮康唑耐药的有3株(MIC>4μg/ml);对咪康唑耐药的有6株(MIC>4μg/ml)。②11株耐氟康唑的白假丝酵母菌中,有5株对罗丹明6G的外排明显增加,与敏感株比较,有显著差异性(P<0.01)。而在这些菌株中,CDRl和CDR2基因的相对表达水平与敏感株比较,也显著增高(P<0.01)。③在白假丝酵母菌中,存在着一种可以与DRE元件结合的核转录因子;在5株CDRl基因过度表达的白假丝酵母菌中,有3株其DRE-核转录因子复合物的结合活性较敏感株增高。 结论①白假丝酵母菌对氟康唑产生耐药性与主动外排泵基因过度表达机制相关;②测定白假丝酵母菌中罗丹明6G的外排情况,是筛选主动外排泵基因过度表达的耐药性菌株的一种有效方法。③在白假丝酵母菌中,存在着一种可与DRE元件结合的转录调节因子,且在氟康唑耐药菌株中的结合活性较敏感菌株增高而导致转录增加,使CDRl基因过度表达而导致耐药。

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