乙型肝炎病毒HBx蛋白的表达纯化及Anti-HBx单克隆抗体的制备与初步应用-论文-万方医学网

乙型肝炎病毒HBx蛋白的表达纯化及Anti-HBx单克隆抗体的制备与初步应用

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摘要乙型肝炎(Hepatitis B virus，HBV)是我国当前最常见的一种传染病，能引发严重的公共卫生问题。原发性肝细胞癌(HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人们的健康。根据流行病学调查统计，HBV感染者发生HCC的几率较正常人高100倍，HBV致癌的具体机制目前尚不明确。既往研究发现乙型肝炎病毒X蛋白（Hepatitis B virus X protein）可能在增强HBV复制和HCC发生发展过程中发挥重要作用。HBx是一个多功能蛋白，在细胞内具有转录激活、导致细胞凋亡、激活多种信号转导通路、干扰细胞DNA修补等特性，可能在HCC的发生、发展和侵袭转移阶段，通过多种尚未明确的机制，直接或间接地发挥调节作用。探讨HBx蛋白结构和功能是当前HBV研究的重要热点之一。<br>　　本研究利用E.Coli原核表达系统对目前己知的基因型A-I的HBx进行非融合表达，建立了一套稳定的、适用于不同基因型的rHBx表达、纯化和复性方法，获得了9种HBV基因型的高纯度重组HBx。并以此为基础，制备了41株Anti-HBx单克隆抗体。通过表位分析、单抗性质鉴定和一系列反应性评估实验，筛选出了适用于蛋白印迹、免疫共沉淀和免疫荧光等功能性检测的高亲和力Anti-HBx单抗。借助Anti-HBx单抗，运用免疫共沉淀方法在转染HBV1.3倍基因组的HepG2细胞中证实HBx可通过与Bcl-2和Bcl-XL的直接相互作用导致细胞凋亡和坏死。<br>　　综上所述，本研究建立的重组HBx蛋白表达纯化方法为进一步解析HBx的结构奠定了重要基础，发展的高亲和力Anti-HBx单抗为HBx的功能研究提供了关键技术工具。