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一种复合纤维蛋白凝胶的制备方法及其应用

摘要本发明公开了一种复合纤维蛋白凝胶的制备方法及其应用,所述纤维蛋白凝胶制备包括:用差速离心法从玫瑰瓣中提取玫瑰源性外泌体样纳米颗粒,使用电穿孔法将抗菌肽融入玫瑰源性外泌体样纳米颗粒内部,将制备好包裹抗菌肽的玫瑰源性外泌体样纳米颗粒与纤维蛋白原混合填充至双腔注射器的一个管腔中制得第一初始液,将新生霉素与凝血酶混合后填充至双腔注射器的另一个管腔中制得第二初始液;将第一初始液和第二初始液混合即可制得复合纤维蛋白凝胶。本发明制备工艺简单,条件温和,具有载药种类多样、高穿透性、治疗机制互补和生物安全性等优点;同时具有止血、抗菌和促进伤口愈合等多重作用,可广泛应用于急救止血和感染的伤口愈合。

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专利类型 发明专利
申请/专利号 CN202410455962.X
申请日期 2024-04-16
公开/公告号 CN118340870A
公开/公告日 2024-07-16
主分类号 A61K38/48(2006.01) A A61 A61K A61K38
分类号 A61K38/48(2006.01) A61K9/06(2006.01) A61P17/02(2006.01) A61P7/04(2006.01) A61P31/04(2006.01) A61P29/00(2006.01) A61K38/36(2006.01) A61K38/02(2006.01) A61K31/7048(2006.01) A61K36/738(2006.01) A61K38/48 A61K9/06 A61P17/02 A61P7/04 A61P31/04 A61P29/00 A61K38/36 A61K38/02 A61K31/7048 A61K36/738
申请/专利权人 云南农业大学
主申请人地址 650201 云南省昆明市盘龙区金黑公路95号
专利代理机构 北京成实知识产权代理有限公司
代理人 冯娜
国别省市代码 云南;53
主权项:
1.一种复合纤维蛋白凝胶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: S1、材料准备:食用玫瑰花瓣、新生霉素、凝血酶、纤维蛋白原、抗菌肽、双腔注射器、高速搅拌器、滤网、烧杯、电转杯、美国伯乐Gene Pulser Xcell电穿孔系统和差速离心机; S2、采用差速离心法在食用玫瑰花瓣中提取制备玫瑰源性外泌体样纳米颗粒; S3、使用电穿孔法将抗菌肽包覆在玫瑰源性外泌体中制备包裹抗菌肽的玫瑰源性外泌体样纳米颗粒; S4、将制备好包裹抗菌肽的玫瑰源性外泌体样纳米颗粒与纤维蛋白原混合填充至双腔注射器的一个管腔中制得第一初始液,将新生霉素与凝血酶混合后填充至双腔注射器的另一个管腔中制得第二初始液; S5、将注射器口对准伤口部位,推动双腔注射器同时将管腔内的第一初始液和第二初始液喷洒至患者伤口处,喷洒后第一、二初始液相互反应形成复合纤维蛋白凝胶。 2.根据权利要求1所述的一种复合纤维蛋白凝胶的制备方法,其特征在于,S2中,所述提取制备玫瑰源性外泌体样纳米颗粒包括以下步骤: S2.1、将食用玫瑰花瓣置入高速搅拌器中进行5~10分钟粉碎,粉碎后进行1~2分钟均质,得到均质液; S2.2、将均质液倒入150目滤网上进行过滤,通过烧杯收集滤汁; S2.3、将滤汁倒入差速离心机中进行8~12分钟的1000xg离心,然后进行18~22分钟的2000xg离心,在进行28~32分钟的4000xg离心,最后进行58~62分钟的10000xg离心,离心结束后静置8~10分钟,收集上清液; S2.4、将收集的上清液置入温度小于4℃的差速离心机中进行88~92分钟的100000xg离心;得到玫瑰源性外泌体样纳米颗粒。 3.根据权利要求2所述的一种复合纤维蛋白凝胶的制备方法,其特征在于,所述玫瑰源性外泌体样纳米颗粒在动态光散射和透射电镜的结果显示平均尺寸为100nm。 4.根据权利要求1所述的一种复合纤维蛋白凝胶的制备方法,其特征在于,S3中,所述制备包裹抗菌肽的玫瑰源性外泌体样纳米颗粒包括以下步骤: S3.1、将得到的100μg玫瑰源性外泌体样纳米颗粒与5μg抗菌肽混合,并加入100μL的PBS缓冲液,制得混合液; S3.2、将得到的混合液置入电转杯中,然后将电转杯置入美国伯乐Gene Pulser Xcell电穿孔系统电转化细胞中进行电穿孔,得到初始液; S3.3、然后将得到的初始液置入温度小于4℃的差速离心机中进行88~92分钟的100000xg离心,以除去游离的抗菌肽和缓冲液成分,得到裹抗菌肽的玫瑰源性外泌体样纳米颗粒。 5.根据权利要求4所述的一种复合纤维蛋白凝胶的制备方法,其特征在于,S3.2中,所述电穿孔在400V和125μF下进行,有两个脉冲。 6.根据权利要求1所述的一种复合纤维蛋白凝胶的制备方法,其特征在于,所述电转杯为基因脉冲仪电转杯。 7.一种复合纤维蛋白凝胶的应用,其特征在于,所述复合纤维蛋白凝胶在感染伤口愈合中的应用。 8.根据权利要求7所述的一种复合纤维蛋白凝胶的应用,其特征在于,所述复合纤维蛋白凝胶在感染伤口愈合中的应用,具体在止血、抗菌和促伤口愈合上的应用。
法律状态 实质审查
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