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一种携载地塞米松的间充质干细胞外泌体复合凝胶的制备方法及其产品与应用

摘要本发明公开了一种携载地塞米松的外泌体复合凝胶的制备方法:将二硬脂酰磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇5000‑N‑羟基琥珀酰亚胺酯与3‑氨基‑1,2‑丙二醇溶于缓冲液中,搅拌反应得到DSPE‑PEG5000‑2OH;将DSPE‑PEG5000‑2OH和携载地塞米松的外泌体在缓冲液中混合,得到膜修饰后的携载地塞米松的外泌体;用修饰苯硼酸基团的透明质酸HA‑PBA溶液重悬膜修饰后的携载地塞米松的外泌体,再加入单宁酸溶液交联形成携载地塞米松的间充质干细胞外泌体复合凝胶。本发明还公开了上述方法制备得到外泌体复合凝胶及在制备治疗脊髓损伤的药物上的应用。该外泌体复合凝胶体系生物相容性好、抗炎活性佳、可ROS响应性释放外泌体,具有良好的治疗效果。

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专利类型 发明专利
申请/专利号 CN202410827214.X
申请日期 2024-06-25
公开/公告号 CN118845616A
公开/公告日 2024-10-29
主分类号 A61K9/06(2006.01) A A61 A61K A61K9
分类号 A61K9/06(2006.01) C12N5/0775(2010.01) A61K31/573(2006.01) A61K47/36(2006.01) A61K47/24(2006.01) A61K47/46(2006.01) A61P25/00(2006.01) A61P5/44(2006.01) A61K9/06 C12N5/0775 A61K31/573 A61K47/36 A61K47/24 A61K47/46 A61P25/00 A61P5/44
主申请人地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号
专利代理机构 杭州天勤知识产权代理有限公司
代理人 白静兰
国别省市代码 浙江;33
主权项:
1.一种携载地塞米松的间充质干细胞外泌体复合凝胶的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括: (1)将二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000-N-羟基琥珀酰亚胺酯与3-氨基-1,2-丙二醇溶于缓冲液中,搅拌反应得到修饰邻二羟基的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺化合物,即,DSPE-PEG5000-2OH; (2)将DSPE-PEG5000-2OH和携载地塞米松的外泌体在缓冲液中混合,得到膜修饰后的携载地塞米松的外泌体; (3)用修饰苯硼酸基团的透明质酸HA-PBA溶液重悬膜修饰后的携载地塞米松的外泌体,再加入单宁酸溶液交联形成携载地塞米松的间充质干细胞外泌体复合凝胶。 2.根据权利要求1所述的携载地塞米松的间充质干细胞外泌体复合凝胶的制备方法,其特征在于,在步骤(1)中,所述DSPE-PEG5000-2OH的制备方法为: (1-1)将100~200mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000-N-羟基琥珀酰亚胺酯与5~10mg 3-氨基-1,2-丙二醇溶于缓冲液中,滴加NaOH溶液调节pH到8~9,室温反应8~16h,得到反应液; (1-2)将反应液收集到透析袋中,截留分子量:3~8kDa,超纯水透析进行纯化; (1-3)将纯化的产物冷冻并通过冻干得到修饰邻二羟基的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺化合物,DSPE-PEG5000-2OH。 3.根据权利要求1所述的携载地塞米松的间充质干细胞外泌体复合凝胶的制备方法,其特征在于,在步骤(2)中,所述携载地塞米松的外泌体的制备方法包括: (2-1)收集间充质干细胞的培养基,将所述培养基超速离心得到外泌体;检测外泌体的总蛋白量,并用于外泌体的定量; (2-2)将50~100μg/mL的外泌体和100~200μg/mL的地塞米松分散于缓冲液中,置于冰上并放入探头超声仪中探超; (2-3)探超结束后,将外泌体悬液置于水浴中孵育0.5~1h,再放入超速离心机中离心得到载携载地塞米松的外泌体。 4.根据权利要求3所述的携载地塞米松的间充质干细胞外泌体复合凝胶的制备方法,其特征在于,在步骤(2)中,所述膜修饰后的携载地塞米松的外泌体的制备方法为: (2-4)用缓冲液溶解DSPE-PEG5000-2OH得到1~2mg/mL的溶液,加入50~200μg蛋白含量的携载地塞米松的外泌体,水浴中孵育30~60min,使DSPE-PEG5000-2OH嵌入携载地塞米松的外泌体膜上; (2-5)采用超速离心的方式将游离的DSPE-PEG5000-2OH去除,用缓冲液吹打重悬沉淀,再次超离,得到的沉淀即为膜修饰后的携载地塞米松的外泌体。 5.根据权利要求1所述的携载地塞米松的间充质干细胞外泌体复合凝胶的制备方法,其特征在于,在步骤(3)中,所述修饰苯硼酸基团的透明质酸HA-PBA的制备方法包括: (3-1)将100mg透明质酸和30~60mg 2-氨基苯硼酸溶解于去离子水中,搅拌溶解,得到HA溶液; (3-2)将48~96mg EDC和34~68mg HOBt溶解在200μL DMSO后,再加入到HA溶液中,滴加HCl溶液调节pH值到5,室温搅拌反应24~48h,得到反应液; (3-3)将反应液收集到透析袋中,截留分子量:3~8kDa,超纯水透析1~3天,将纯化的产物冷冻并通过冻干得到修饰苯硼酸基团的透明质酸,即,HA-PBA。 6.根据权利要求1所述的携载地塞米松的间充质干细胞外泌体复合凝胶的制备方法,其特征在于,在步骤(3)中:用浓度为40mg/mL的HA-PBA溶液重悬膜修饰的载药外泌体,室温孵育30~60min后,再加入等体积浓度为10~40mg/mL TA溶液交联形成载药外泌体复合凝胶。 7.一种权利要求1-6任一所述的制备方法得到的携载地塞米松的间充质干细胞外泌体复合凝胶。 8.一种权利要求8所述的携载地塞米松的间充质干细胞外泌体复合凝胶在制备治疗脊髓损伤的药物上的应用。
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