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水溶性CuInS2-ZnS-AFP量子点荧光探针对肝癌细胞的标记及毒性研究

摘要目的:通过检测水溶性 CuInS2-ZnS-AFP荧光探针对肝癌细胞株(Hep-G2)的毒性,及其生物相容性,综合评估其用于肝癌研究的可能性。<br>  方法:免疫组化方法证实肝癌细胞株 Hep-G2可表达 AFP抗原后,选取 AFP作为靶向抗原。制备水溶性量子点 CuInS2-ZnS,检测其光学性能、符合生物学荧光要求后,偶联抗 AFP抗体,成为可与 AFP抗原相结合的、具有靶向性的量子点荧光探针CuInS2-ZnS-AFP。用MTT法和流式细胞术检测该探针对肝癌细胞株Hep-G2的增殖抑制及促凋亡作用,验证该探针的生物毒性。将 CuInS2-ZnS量子点与Hep-G2共培养的方法观察细胞形态,并用量子点探针 CuInS2-ZnS-AFP对 Hep-G2细胞株进行标记显色,验证其生物相容性。<br>  结果:实验通过免疫组化法证实了Hep-G2细胞浆大量表达AFP抗原。量子点光学性能测试表明 CuInS2-ZnS量子点的有合适的 Stokes’频移,适合用于细胞标记。MTT实验表明 CuInS2-ZnS-AFP荧光探针对 Hep-G2细胞的毒性很小,标记浓度(0.24mg/ml)下24h细胞存活率大于90%,此条件下的CdTe-ZnS-AFP量子点探针的细胞存活率约70%。CuInS2-ZnS-AFP组低浓度(<20%)下抑制率与时间无统计学关系(P>0.05),中高浓度下抑制率与孵育时间和探针浓度呈正相关, CdTe-ZnS-AFP组抑制率与孵育时间和探针浓度呈时间-效应(P<0.05)和剂量-效应(P<0.05)。流式细胞术检测标记浓度的探针与 Hep-G2细胞共培养2h、6h、24h、48h和72h后的细胞凋亡率,数据与 MTT结果基本一致。CuInS2-ZnS量子点与 Hep-G2共培养后细胞无明显形态学改变,细胞标记实验发现紫外光激发下 CuInS2-ZnS-AFP荧光探针在 Hep-G2细胞浆内发射出很强的黄色荧光,即与CuInS2-ZnS量子点连接后所得探针保留了量子点独特的光学性能。<br>  结论:(1)本实验证实了人肝癌细胞株 Hep-G2细胞浆内富含 AFP抗原;(2)流式细胞术和 MTT实验表明这种新型的水溶性三元量子点探针的细胞毒性很小。(3)细胞标记实验表明与 AFP抗体偶联后的 CuInS2/ZnS量子点可以在保留其光学特性的同时有效地进入 Hep-G2细胞内,紫外光激发后胞浆发射强黄色荧光。(4)综合实验结果,低毒性CuInS2-ZnS-AFP荧光探针具有良好的生物相容性。

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