检索历史 清除

摘要目的：利用饮食诱导的高血糖、高血脂小鼠模型，考察绞股蓝总皂苷对糖脂代谢紊乱的药效，并进一步考察与糖脂代谢密切相关的胆汁酸合成转运通路在其中的作用。阐述绞股蓝总皂苷调控糖脂代谢的作用机制，为绞股蓝总皂苷及其中的主要皂苷成分后期的制剂开发明确靶点。<br>　　方法：⑴动物模型建立：雄性C57BL/6J小鼠，自由摄取高脂高糖食物（脂肪：60％；糖：20%；蛋白质20%）16周，以体重、血清总胆固醇、血糖水平、血清低密度脂蛋白水平等定量指标的变化，结合组织病理学的定性观察指标，判断造模终点。⑵绞股蓝总皂苷调控糖脂代谢的药效学及安全性研究：造模成功后，治疗组小鼠每日（qd）口服给予绞股蓝总皂苷（250 mg/Kg）2、4、10、16、22周。用HE染色法检查肝脏组织病理学变化。罗格列酮（降血糖药，1.2 mg/Kg，qd）、辛伐他汀（降胆固醇药，20 mg/Kg，qd）、非诺贝特（降甘油三酯药，35 mg/Kg， qd）分别用作阳性对照。阴性对照组小鼠给予与绞股蓝总皂苷给药量等体积的羧甲基纤维素钠溶液（qd）。以上各组小鼠均持续给予高脂高糖饲料喂养。另取一组小鼠给予普通饲料喂养以监测小鼠生理学基础数据。以体重、血清总胆固醇水平、血糖水平、血清低密度脂蛋白水平等为定量指标，以组织病理学变化为定性指标，考察绞股蓝总皂苷调控糖脂代谢的药效。同时，监测血清转氨酶水平、各种脏器指数以考察绞股蓝皂苷长期给药的安全性。⑶胆汁酸通路相关因子的基因表达变化研究：提取分离药效学研究中各组小鼠的肝脏及十二指肠mRNA。考察11种与胆汁酸合成、转运调控直接相关的肝脏基因表达的变化，以明确绞股蓝调控糖脂代谢的药效是否与 FXR介导的胆汁酸通路有一定关系。由于FXR→Fgf15通路是肠道特有的调控通路，FXR和Fgf15的肠道表达也纳入研究。⑷绞股蓝总皂苷对胆汁酸分子的调控作用研究：除胆汁酸合成与转运相关基因的表达变化外，本研究还针对胆汁酸分子进行直接测定。本部分通过 LC-MS/MS分析药效学研究中各组肝脏中14种主要胆汁酸分子的变化规律，以和mRNA的变化以及药效学指标的变化进行相关性分析，共同阐述绞股蓝总皂苷的作用机制。<br>　　结果：①高血脂高血糖小鼠模型成功建立：小鼠自由摄取模型饲料16周后，其体重（P<0.01）、血脂水平（P<0.01）、血糖（P<0.05）水平均显著升高，其血脂主要特点为血清总胆固醇与低密度脂蛋白胆固醇同时升高，并且还观察到高脂饮食组小鼠产生糖耐量受损和胰岛素抵抗。组织病理学检查显示小鼠肝细胞内出现大量脂滴。②绞股蓝总皂苷调控血脂血糖水平药效明确：绞股蓝皂苷给药10周后，观察到血糖发生显著下降（P<0.05）；继续给药至16周观察到血清总胆固醇水平、低密度脂蛋白胆固醇水平均显著下降（P<0.01）。给药2周组织病理学检查发现绞股蓝皂苷能减少肝细胞中的脂滴大小和数量。给药22周观察到肝系数（P<0.05）和血清中谷草转氨酶的含量显著下降（P<0.05）。③绞股蓝总皂苷调控糖脂代谢的作用机制：以胆汁酸合成及调控通路上的关键因子为研究对象，本论文分别在基因表达水平和胆汁酸分子水平进行了研究。结果表明，胆汁酸合成的关键酶CYP8B1和CYP7A1在高脂食物压力下均显著下调，而绞股蓝总皂苷的给药有效的逆转了这一异常趋势。与之对应的，CYP7A1和 CYP8B1与他们的上游负调控子的表达呈现明显的负相关关系。在胆汁酸水平，总胆汁酸，尤其是结合型胆汁酸的分泌在绞股蓝总皂苷组显著上调，与基因表达数据一致。此外，在整个通路的宏观水平，通过对基因表达及胆汁酸水平的主成分分析以及热图可视化，清晰地表明，绞股蓝总皂苷显著的影响了胆汁酸合成代谢通路。最关键的是，这些变化出现的时间均在32周与38周之间，与药效学参数非常吻合。<br>　　结论：绞股蓝总皂苷具有显著的调控糖脂代谢的功效，肝肠胆汁酸通路的变化与该过程显著相关，是目前发现的绞股蓝总皂苷降血糖血脂最可能的机制之一。靶点的明确为进一步的绞股蓝相关制剂开发奠定了基础。