检索历史 清除

摘要目的：<br>　　研究槲皮素(Quercetin)对雷公藤甲素（Triptolide，TP）引起肝损伤的保护性作用,同时初步探讨其作用机制。<br>　　方法：<br>　　1、槲皮素对TP诱导急性肝损伤的保护性作用。50只雌性C57BL/6小鼠随机分为5组，即正常对照组、TP模型组、槲皮素低剂量组（20mg/kg）、槲皮素中剂量组（50mg/kg）、槲皮素高剂量组（80mg/kg）。用药组每日给予不同剂量的槲皮素，连续十天，每日一次；正常对照组和模型组给予等量的5‰CMC-Na，末次给药4h后，除正常组外其余各组均灌胃给予500μg/kg的 TP建立小鼠急性肝损伤模型，22h后取血，处死小鼠，取肝备用。分别检测小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平，HE染色观察小鼠肝组织病理改变，分光光度法检测肝组织匀浆中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及还原型谷胱甘肽（GSH）的表达水平。<br>　　2、急性肝损伤及槲皮素应用后 Th17/Treg细胞平衡变化及TLR4-MyD88-NF-κB和 Tim-3信号通路对Th17/Treg细胞平衡变化的影响。为研究肝损伤发生及槲皮素应用后Th17/Treg细胞平衡变化情况，采用ELISA和RT-PCR法检测小鼠体内Th17、Treg相关细胞因子白细胞介素IL-17、IL-10水平；免疫组化和 RT-PCR法检测肝脏中维甲酸孤儿核受体（ROR-γt）、叉头状转录因子（Foxp3）表达，以此判断Th17/Treg细胞比率；采用Western blot分别检测TLR4、MyD88、NF-κB和Tim-3的表达水平。<br>　　3、TLR4通路阻断剂TAK-242对Th17/Treg平衡变化的影响。雌性C57BL/6小鼠随机分为3组，每组10只，分别为正常对照组、TP模型组、TAK-242(1mg/kg)组。除空白组外，模型组及TAK-242组均灌胃给予500μg/kg的TP建立小鼠急性肝损伤模型，在给予TP前1h，TAK-242组小鼠腹腔注射 TAK-242，对照组及模型组给予等量生理盐水。22h后取血，处死小鼠，无菌留取肝组织备用。分别检测小鼠血清中ALT、AST水平，HE染色观察小鼠肝组织病理改变情况，分光光度法检测肝组织匀浆中MDA、SOD及GSH的表达水平；采用ELISA和RT-PCR检测小鼠体内Th17、Treg相关细胞因子白细胞介素IL-17、IL-10水平；免疫组化和 RT-PCR法检测肝脏中维甲酸孤儿核受体（ROR-γt）、叉头状转录因子（Foxp3）表达，以此判断 Th17/Treg细胞比率；采用Western blot分别检测TLR4、MyD88、NF-κB和Tim-3的表达水平。<br>　　结果：<br>　　1、与正常对照组相比，TP组小鼠血清中ALT、AST、MDA含量显著升高，伴有SOD、GSH水平明显降低，病理切片提示有较多炎性细胞浸润，提示肝损伤模型构建成功。槲皮素低剂量组 ALT、AST、MDA水平略有降低，SOD、GSH水平稍有升高，但不明显；槲皮素中剂量组ALT、AST、MDA含量降低，SOD、GSH水平升高；槲皮素高剂量组ALT、AST、MDA水平降低更明显，SOD、GSH水平显著升高，病理切片显示肝细胞坏死程度明显减轻，提示槲皮素高剂量组对TP诱导的肝损伤具有一定的保护作用。<br>　　2、ELISA及RT-PCR结果均显示，与模型组相比，槲皮素高剂量组能显著降低IL-17表达水平，明显升高IL-10表达水平；免疫组化结果显示模型组Foxp3表达水平显著降低，ROR-γt表达水平明显升高，给药后可以纠正这一失衡。Western Blot结果显示模型组小鼠TLR4、MyD88、NF-κB水平显著升高，Tim-3水平降低；给予高剂量槲皮素后可以降低TLR4、MyD88、NF-κB表达，Tim-3表达水平升高。<br>　　3、给予TAK-242后，血清中ALT、AST水平及肝脏组织中MDA、IL-17及TLR4、MyD88、NF-κB的表达显著降低，肝脏组织中SOD、GSH、IL-10及Tim-3的表达水平升高。肝脏病理切片显示给予TAK-242后肝脏坏死程度明显减轻。<br>　　结论:<br>　　1、槲皮素对TP诱导急性肝损伤具有一定的保护性作用。<br>　　2、免疫肝损伤发生后Th17/Treg比率失衡，槲皮素应用后可以纠正这种失衡，且这种保护作用与抑制TLR4-MyD88-NF-κB通路活化及激活Tim-3信号通路相关。<br>　　3、TLR4通路阻断后可通过调节Th17/Treg失衡纠正肝损伤。