换一批摘要合成抗体文库是选用经过优化的抗体序列作为骨架区，与天然的或人工合成的互补决定区（Complementaritydetermining regions,CDRs）拼接构建而成，具有设计灵活，可控性强，库容量大以及多样性好的优点。合成抗体文库已成为天然文库和免疫文库的补充，是筛选高亲和力抗体的重要来源，对于抗体药物的研发有显著意义。本课题设计、构建了全合成纳米抗体文库并进行了初步评价，以HIF-1α-PAS-B为抗原，从抗体文库中筛选特异性纳米抗体，验证抗体文库的生物学活性。<br> 首先，通过对天然纳米抗体文库大规模测序以及测序结果的比对，确定要构建的全合成纳米抗体文库骨架区序列和CDRs区氨基酸数目，随后合成VHH模板序列并组装至pCantab5E噬菌粒载体上。其次，用NNK随机化的方法在三个CDRs区随机引入突变，通过重叠延伸PCR获得VHH全长片段并克隆至pCantab5E噬菌粒载体上，电转大肠杆菌TG1获得全合成纳米抗体文库，从库容、抗体基因插入率以及多样性等方面评价抗体文库。经鉴定，构建的全合成纳米抗体文库多样性良好，库容为4.2×1010 CFU，VHH基因插入正确率为82%。最后，为了验证抗体文库的生物学活性，制备了HIF-1α-PAS-B蛋白作为抗原，应用噬菌体展示技术从全合成纳米抗体文库中筛选得到特异性纳米抗体。
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