摘要背景:<br> 免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia, ITP)为儿童常见免疫性疾病。我们前期研究发现有较高比例的抗核仁抗体(Antinucleolar antibody, AnoA)阳性的儿童被诊断为ITP。AnoA在许多疾病发病进程中发挥重要作用,然而尚未见报道关于 AnoA及其靶抗原分子在ITP中的作用机制。<br> 目的:<br> 筛选及鉴定AnoA阳性ITP患儿血清中AnoA识别的靶抗原。<br> 方法:<br> 利用HEP-2细胞系建立细胞固定-抗体结合-抗体洗脱-抗体中和体系以纯化患儿血清中 AnoA。利用蛋白免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)和质谱分析法筛选与过ITP患儿血清中AnoA结合可能的靶抗原。通过质粒过表达和细胞免疫荧光鉴定靶抗原。<br> 结果:<br> 成功纯化ITP患儿血清中AnoA。核仁素(Nucleolin, NCL)、角蛋白II型细胞骨架1(Keratin type II cytoskeletal1, KRT1)、角蛋白II型表皮细胞骨架2(Keratin type II cytoskeletal2 epidermal, KRT2)、角蛋白I型细胞骨架10(Keratin type I cytoskeletal10, KRT10)等蛋白可能为ITP患儿血清中AnoA结合的靶抗原。经鉴定其中NCL可能不是与ITP患儿血清中 AnoA结合的靶抗原。KRT1、KRT2、KRT10等蛋白的作用待进一步验证。<br> 结论:<br> 本研究为 ITP患儿血清中抗核仁抗体靶抗原的筛选鉴定提供有效方法,可进一步深化我们对ITP发病机制的认识。
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