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儿童免疫性血小板减少症血清中抗核仁抗体纯化以及靶抗原的筛选鉴定

摘要背景:<br>  免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia, ITP)为儿童常见免疫性疾病。我们前期研究发现有较高比例的抗核仁抗体(Antinucleolar antibody, AnoA)阳性的儿童被诊断为ITP。AnoA在许多疾病发病进程中发挥重要作用,然而尚未见报道关于 AnoA及其靶抗原分子在ITP中的作用机制。<br>  目的:<br>  筛选及鉴定AnoA阳性ITP患儿血清中AnoA识别的靶抗原。<br>  方法:<br>  利用HEP-2细胞系建立细胞固定-抗体结合-抗体洗脱-抗体中和体系以纯化患儿血清中 AnoA。利用蛋白免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)和质谱分析法筛选与过ITP患儿血清中AnoA结合可能的靶抗原。通过质粒过表达和细胞免疫荧光鉴定靶抗原。<br>  结果:<br>  成功纯化ITP患儿血清中AnoA。核仁素(Nucleolin, NCL)、角蛋白II型细胞骨架1(Keratin type II cytoskeletal1, KRT1)、角蛋白II型表皮细胞骨架2(Keratin type II cytoskeletal2 epidermal, KRT2)、角蛋白I型细胞骨架10(Keratin type I cytoskeletal10, KRT10)等蛋白可能为ITP患儿血清中AnoA结合的靶抗原。经鉴定其中NCL可能不是与ITP患儿血清中 AnoA结合的靶抗原。KRT1、KRT2、KRT10等蛋白的作用待进一步验证。<br>  结论:<br>  本研究为 ITP患儿血清中抗核仁抗体靶抗原的筛选鉴定提供有效方法,可进一步深化我们对ITP发病机制的认识。

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