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摘要研究背景：外伤后的肢体再生一直是医学的难点和研究热点，免疫系统及其调控机制被认为在伤口愈合及再生完成的过程中发挥着关键的作用。有尾两栖类动物蝾螈，具有独特而强大的再生能力，是研究肢体再生过程中的理想模型。巨噬细胞对肢体早期再生过程至关重要，但是对启动巨噬细胞募集至损伤部位的信号，目前还不清楚。白介素8（IL-8）是一种对巨噬细胞有强烈趋化作用的细胞因子，在炎症反应中起到关键作用，IL-8也参与细胞的迁移、血管生成、有丝分裂等生命活动。但是IL-8在伤口愈合和再生中的作用及其机制的相关研究却很少。<br>　　方法及结果：本实验首先建立东方蝾螈断肢再生模型，根据蝾螈转录组测序结果设计合成引物，利用PCR技术首次克隆出蝾螈IL-8基因开放阅读框（ORF）共306bp，可编码101个氨基酸。通过构建原核表达载体pET32a/IL-8，成功诱导表达IL-8融合蛋白，其大小约为29kD。随后将镍柱纯化得到的融合蛋白作为抗原，制备蝾螈IL-8多克隆抗体，并利用ELISA、细胞转染、WesternBlot等技术检测抗体特异性。利用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)，切片原位杂交技术观察蝾螈肢体再生不同时间点IL-8在核酸水平的表达变化和分布，发现IL-8mRNA在肢体再生早期有明显的上调，随着伤口愈合IL-8表达量逐渐下调，直到肢体再生14dpa（daypostamputation）恢复到正常水平，IL-8mRNA表达主要集中分布在肢体截肢部位处。随后利用IL-8多克隆抗体，观察肢体再生不同时间点IL-8在蛋白水平的表达变化及分布，通过WesternBlot结果显示在蝾螈断肢后，IL-8蛋白表达量持续升高，在再生3dpa时达到峰值，直至再生14dpa左右IL-8蛋白的表达逐渐恢复到正常基线水平，利用荧光免疫组织染色技术在肢体再生早期伤口处检测到大量IL-8阳性细胞。<br>　　结论：本研究证实IL-8表达在蝾螈肢体再生的早期显著上调，推测IL-8可能参与肢体再生早期过程。这为进一步揭示IL-8基因在肢体再生过程中的功能，解释其相关作用机制提供了基础。