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摘要2009年，M型磷脂酶A2受体（M-Type Phospholipase A2Receptor,PLA2R）被鉴定为成人特发性膜性肾病（Idiopathicmembranous nephropathy,IMN）的主要靶抗原，这一发现使得IMN的研究取得了重大的突破。PLA2R在人足细胞质膜上表达，具有一个较大的胞外区，该胞外区高度糖基化，并且由多个单独的结构域组成。这些单独的结构域可以直接与循环中的自身抗体进行结合。在种情况下产生的免疫应答都是多克隆的。随后，几项重要的研究先后在PLA2R抗原的CysR，CTLD1，CTLD7和CTLD8结构域中确定了反应性表位。并且自身抗体与不同抗原表位之间的结合力存在差异，CysR结构域中存在主要的免疫优势表位能够被大多数IMN患者中的抗PLA2R抗体所识别，而位于PLA2R的C端区域（CTLD7和CTLD8）的表位靠近细胞膜，不易被暴露而较难产生相应的自身抗体。IMN作为一种自身免疫性疾病，深入了解其抗原表位对于探究疾病的病理机制是非常必须的。另一方面，目前抗PLA2R抗体尚不能完全评估疾病活动性和肾脏预后。然而目前与PLA2R抗原表位相关的研究较少，且主要依赖于蛋白质印迹法（Western Blot,WB）酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）进行定性或半定量分析，因此寻求一种更灵敏的定量分析方法检测针对PLA2R不同结构域抗体水平对于研究表位与疾病活动性之间的联系是至关重要的。<br>　　方法和目的：<br>　　将纯化后的重组人PLA2R全长胞外区及PLA2R可溶性结构域(CysR，CTLD1和CTLD678)分别作为抗原进行包被，用稀土离子Eu3+标记山羊抗人IgG抗体，应用时间分辨荧光免疫分析方法（Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA）建立用于检测PLA2R结构域特异性IgG抗体水平的高灵敏定量分析方法。利用建立的TRFIA法检测PLA2R相关MN患者血清中针对CysR,CTLD1和CTLD678结构域的自身抗体水平，并初步分析PLA2R结构域特异性IgG抗体水平与PLA2R结构域识别模式在IMN上的临床意义。<br>　　结果：<br>　　我们通过建立的PLA2R-TRFIA对78份患者血清样本进行筛查，并用20份健康志愿者的血清定义正常范围。9名IgA肾病患者、4名过敏性紫癜性肾炎（Henoch-Schonlein Purpura,HSP）和6名其他肾脏疾病患者血清中的抗PLA2R-IgG抗体水平均未超过临界值，而在59名IMN患者中发现有46名患者的血清抗PLA2R-IgG抗体呈阳性，进一步研究发现54名IMN患者抗PLA2R-IgG4抗体呈阳性。<br>　　在54名PLA2R相关MN患者队列中（指PLA2R特异性抗体阳性的MN患者），CysR，CTLD1和CTLD678结构域特异性IgG抗体的阳性率分别为75.9%，46.3%，44.4%，而CysR，CTLD1和CTLD678结构域特异性IgG4抗体的阳性率分别为94.4%，96.3%，96.3%。此外，抗CysR-IgG抗体水平和抗CTLD678-IgG4抗体水平在不同蛋白尿的患者之间存在显著差异（P＜0.05）。我们根据初次诊断时患者血清IgG特异性自身抗体对CysR,CTLD1和CTLD678结构域的反应性对患者进行分层：无结构域反应性或仅识别1种结构域（模式1）,识别2种结构域（模式2）和识别3种及以上结构域（模式3）。三组患者在抗PLA2R-IgG抗体水平和抗PLA2R-IgG4抗体水平上存在显著性差异（P=0.003,P=0.007），并且初次诊断时自身抗体能够识别两个或以上结构域的患者，蛋白尿水平更高（P=0.04），血清白蛋白水平更低（P=0.01），血清肌酐水平更高（P=0.03），肾小球滤过率估计值（estimated Glomerular Filtration Rate,eGFR）更低（P=0.02）。<br>　　结论：<br>　　首次建立了PLA2R结构域特异性TRFIA法，并且在PLA2R相关MN患者中得到了初步应用。研究数据显示抗CysR-IgG抗体和抗CTLD678-IgG4抗体可能可以作为在监测IMN疾病活动性的早期生物标志物。此外，在初次诊断时抗PLA2R-IgG抗体所识别的结构域数量越多，患者的肾功能损伤更严重，抗PLA2R-IgG抗体水平也显著更高。因此，在临床诊断方面，结构域识别模式有潜力发展为评估疾病严重程度的新工具，为治疗方案提供一定的指导。