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摘要新型冠状病毒肺炎（Coronavirus Disease2019，COVID-19）是由新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus2，SARS-CoV-2）引起的新型传染性疾病。在该疾病的感染过程中，大多感染患者依靠自身免疫能力无法在短期内有效地清除病毒，其中有基础疾病或者免疫力低下感染患者甚至在有医疗设备支持的条件下仍然具有较高的死亡率。中和性单克隆抗体具有极高的抗原特异性，是在短期内清除SARS-CoV-2的特效治疗方式。在本文中，基于对COVID-19康复患者血清中SARS-CoV-2受体结合域（Receptor binding domain，RBD）特异性抗体反应强度的检测，发现COVID-19康复患者血清针对SARS-CoV-2RBD蛋白的抗体反应强度与其疾病严重程度呈显著正相关，即重、中症患者具有高水平的SARS-CoV-2RBD蛋白抗体反应，而轻症及无症状患者具有低水平的SARS-CoV-2RBD蛋白抗体反应。紧接着，进一步验证了重症康复病人血清阻断RBD与其受体蛋白血管紧张素转化酶2（Angiotensin converting enzyme2,ACE2）结合的能力，并选取了血清具备阻断能力的外周血作为样本，通过生物素化的RBD蛋白捕获病毒特异性记忆B细胞，从而制备人源化单克隆抗体。具体地，以RBD-ACE2结合抑制实验中筛选出的重症康复病人外周血作为样本，首先通过流式细胞术分选RBD蛋白特异性的记忆B细胞，然后以单个细胞为基础，通过逆转录PCR以及巢式PCR分别特异性扩增编码免疫球蛋白G（Immune globulin G,IgG）重链以及轻链可变区（Variable region，V区）的基因片段。接着，将其分别克隆至各自的表达载体，然后通过293T真核表达系统表达人源化IgG抗体。最后，通过使用RBD蛋白酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）、RBD-hACE2结合干扰实验、SARS-CoV-2型假病毒中和实验和SARS-CoV-2真病毒抑制实验，筛选出2株针对RBD蛋白的全人源化中和性单克隆抗体，其在SARS-CoV-2体外抑制实验中的IC50值分别为0.020μg/ml和0.127μg/ml，具有较大的潜在临床应用价值。