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大鼠DRG神经元上ASIC电流的分类及其亚基分布特点的研究

摘要目的:<br>   1.验证在大鼠背根神经节(Dorsal root ganglion,DRG)神经元所记录的天然酸敏感离子通道(ASICs)介导的H+-门控电流的特征及分类;<br>   2.观察4种ASIC亚基在背根神经节神经元的表达与分布,初步探讨组织切片上DRG神经元免疫细胞化学特征与单个急性分离DRG神经元电生理特征的相关性。<br>   方法:<br>   采用全细胞膜片钳技术记录急性分离的DRG神经元ASICs介导的H+-门控电流。应用免疫组织化学染色ABC法观察ASIC亚基的表达与分布特点,利用高清病理图文分析系统(HPIAS)对染色切片进行图像采集与分析。<br>   结果:<br>   1.依据ASICs介导的H+-门控电流的激活及失活动力学、电流形状特点、pH依赖性等参数,重复记录到 DRG神经元H+-门控电流四种电流类型:1)短暂快速内向电流型(Transient inward current,T-型);2)持续内向电流型(Sustained inward current,S-型);3)双向内向电流(Biphasic inward current,B-型);4)反向电流(Opposite current,O-型);且所记录到的四种电流类型的比例如下,S-型(64.5%)>O-型(20.3%)>B-型(9%)>T-型(3.8%)。<br>   2.DRG组织切片相同视野下每张切片ASIC亚基免疫反应阳性的神经元数目分别为:<br>   ASIC1是42.00±6.92,ASIC2是55.25±13.12,ASIC3是79.50±23.83,ASIC4是61.00±25.97.按从多到少依次排序为:ASIC3>ASIC4>ASIC2>ASIC1。ASIC1和ASIC3的阳性神经元数目在统计学上存在极显著性差异(P<0.01),而ASIC2和ASIC3的阳性神经元数目之间存在显著性差异(P<0.05)。<br>   3.免疫组织化学结果显示:ASIC1、ASIC3免疫阳性的DRG神经元主要集中在中等(20μm<D<35μm)和小直径(D<20μm)的细胞,而大直径(D>35μm)的DRG神经元较少,中小直径与大直径的阳性神经元的数目进行比较,在统计学上具有显著性差异(p<0.05),但ASIC3的表达多于ASIC1;ASIC2免疫阳性DRG神经元以中、大直径者为多,且中等直径DRG上表达ASIC2亚基的神经元个数和小直径与大直径DRG上的有显著性差异(p<0.05);ASIC4免疫阳性DRG神经元中等直径者显著多于大、小直径的,且具有统计学差异(p<0.05)。<br>   结论:<br>   1.大鼠DRG神经元天然H+-门控电流可明确分为四种类型:T-型、S-型、B-型、O-型,且这四种电流类型在数量比例上存在一定的差异。<br>   2.表达ASIC1,ASIC2,ASIC3,ASIC4亚基的大鼠DRG神经元在数量上存在差异,且四种受体亚基在不同直径的神经元的分布具有一定规律。

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