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摘要炎症是机体防御的保护性反应，但过度炎症是众多疾病的基本病理过程，严重的炎症反应甚至可引起癌变。因此，积极研制抗炎药物，有目的地防止和控制过度炎症对机体造成的不利影响，有着重要的意义。目前市场上对于炎症尚无理想的安全有效治疗药物。临床上普遍使用的COX-2抑制剂虽然具有良好的抗炎作用，但对心血管系统存在毒副作用。 iNOS及其产物NO在炎症反应和氧化应激中起重要作用，并且与COX-2及其产物PGs这一致炎系统之间相互作用，是炎症的重要分子机制之一。iNOS作为抗炎新靶点，已引起人们高度关注。但现己合成开发的iNOS抑制剂存在着选择性差和毒副作用大的问题。近年来从天然药物中筛选出安全有效的抗炎药已经兴起，但尚未见到以iNOS为靶点进行体外筛选中药有效抑制部位的研究，也没有应用多指标对中药源iNOS抑制剂进行抗炎综合评价和机理研究的报道。本文旨在建立一个以iNOS为靶点的体外抗炎药物筛选平台并阐明作用机理。本文的研究主要从以下四个方面进行： 1、小型中药部位库的建立应用有机溶剂、大孔树脂等手段分别获得22味中药的总黄酮、总皂苷、总多糖、总生物碱、总多酚等29个部位，并用紫外分光光度计测定其主要成分含量，13个部位含量在50％以上。 2、体外筛选平台的建立、验证和应用应用Greiss reaction和MTT法，基于细胞建立和优化iNOS抑制剂96孔筛选平台，L-NiL验证平台的可靠性。在此基础上，对小型中药部位库进行了初筛和复筛，得到来源于7味中药的8个强抑制效果的有效部位，均呈时间和剂量依赖性下调NO产量，对激活和静息细胞的细胞活力影响不一。 3、抗炎机理研究8个有效部位均能通过iNOS基因和蛋白水平的表达下调抑制LPS和IFN-γ协同诱导产生的NO产量，6个有效部位对COX-2基因和蛋白的表达也有影响，部分是由于iNOS和COX-2的相互作用。8个有效部位程度不一地下调炎症中细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因水平的表达，可能上调HO-1基因和蛋白水平的表达增加细胞总抗氧化能力，部分是通过干预炎症中重要的信号传导途径如NF-кB、ERK、PPAR-γ途径而发挥抗炎作用。 4、探索性研究单味中药的部位间协同抗炎作用和性味与抗炎药效之间的联系二方面进行了初步研究。 结论: 本文建立了iNOS抑制剂体外筛选平台，该体系具有简便、快速、经济、高效等特点，适于中药部位的筛选。应用平台对小型中药部位库进行筛选，得到8个有效部位，呈剂量依赖性下调iNOS mRNA和蛋白表达，是潜在的iNOS抑制剂。此外，有效部位通过提高细胞总抗氧化能力、上调HO-1和PPAR-γ基因和蛋白表达而干预PPAR-γ途径上调抗炎体系；通过抑制细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因水平的表达，COX-2基因和蛋白的表达、抑制NF-кB的基因表达、p-ERK的蛋白表达而下调致炎体系，通过多靶点、多层次、多途径使细胞内环境恢复平衡。此外，进行了中药有效部位组合协同抗炎及性温味辛与抗炎药效联系分析的初步研究，为性味配伍和靶向型复合新中药的开发提供思路和实验依据。