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脂质筏和质膜微囊的生化分离与组成研究

摘要脂质筏和质膜微囊作为细胞膜上脂质微区的两个亚类,参与了细胞众多生命活动的调控。前人的报道和我们实验室研究都表明,脂质筏和质膜微囊在细胞中执行着不同的功能。山于物质的组成和结构是功能的基础,所以我们感兴趣的是,脂质筏和质膜微囊在物质组成上有什么异同。而目前能把脂质筏和质膜微囊分开,研究其组成成分差异的做法还鲜有报道。由于它们相似的生化性质,以前的研究在分离脂质微区后,脂质筏和质膜微囊相互都混合在一起。我们对传统的超离心方法做了改进,使得在经过多步骤的生化分离后,能够从细胞中得到较纯的脂质微区,并且把其中的脂质筏和质膜微囊分开。电镜下做形态观察和标志性蛋白质与脂质的检测都说明我们分离到的是细胞中真实存在的脂质筏和质膜微囊。通过检测它们的蛋白质成分,我们发现大部分的脂质微区蛋白质在脂质筏或质膜微囊中的定位有倾向性。通过新梯度的分离,不但已知的脂质筏蛋白质(如磷脂酰肌醇锚定蛋白)和质膜微囊蛋白质(如微囊素蛋白)被分开以外,还有其它的、以前不知其确切定位信息的脂质微区蛋白质被特异性地分到脂质筏或质膜微囊组分中。我们挑选了其中的一些蛋白质,用可信度更高的免疫沉淀的方法验证了它们在脂质筏/质膜微囊中的差异性分布。对脂质筏和质膜微囊的脂类分析结果表明,虽然它们都是质膜上富含胆固醇的区域,但脂质筏的胆固醇含量要高于质膜微囊,并且脂质筏更加富集神经节苷脂、鞘脂和部分甘油磷脂。由此,我们认为,尽管之前的研究认为脂质筏和质膜微囊是组成相似的膜结构,但这二者的物质构成的确有显著的差异。正是这些组成的差异提供了它们功能差异的物质基础。<br>   脂质筏和质膜微囊常常作为信号传导和物质运输的平台,在细胞的生命活动中发挥作用。在脂肪细胞中,葡萄糖转运蛋白4(GLuT4)在胰岛素刺激后迁移到脂质筏/质膜微囊中发挥功能。它代表了一类与脂质筏和质膜微囊相关的,受胰岛素影响定位发生改变的蛋白质。我们接下来研究了脂肪细胞受胰岛素刺激时在脂质筏和质膜微囊中定位有变化的蛋白质,试图寻找类似于GLUT4的、在胰岛素刺激后进入或迁出脂质筏/质膜微囊的蛋白。对其结果的分析将有助于我们进一步了解脂质筏和质膜微囊在脂肪细胞执行生理功能中的作用。

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导师 廖侃
学位信息:
中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院 生物学 生物化学与分子生物学(博士) 2009年
发布时间 2010-08-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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