检索历史 清除

摘要本试验以番鸭、高邮鸭和樱桃谷鸭(即英系北京鸭)为研究对象，研究了非伤害性和伤害性毛囊组织取样法对总RNA提取质量的影响，从而为禽类毛囊组织分子生物学的深入研究提供一种新的技术方法。在此基础上，克隆了鸭羽色相关基因刺鼠信号蛋白(Agouti signaling protein，ASIP)和刺鼠相关蛋白(Agouti-relatedprotein，AGRP)基因的部分序列，同时采用半定量RT-PCR的方法研究了ASIP和AGRP基因在番鸭各组织中的表达规律。研究结果如下：<br>　　 ⑴以番鸭、高邮鸭和英系北京鸭非伤害性取样法获得的毛囊组织RNA为模板，用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增了含有Agouti信号蛋白(ASIP)基因的CDS片段，将其克隆测序，获得长为308bp的编码序列。结果表明，高邮鸭和英系北京鸭所得的部分ASIP基因的CDS序列完全一致，同源性为100％。与GenBank上登陆的原鸡及鹌鹑的ASIP对应的CDS序列进行比对，番鸭、高邮鸭和英系北京鸭的同源性均在92.53％以上。番鸭、高邮鸭和英系北京鸭ASIP基因的CDS片段编码102个氨基酸，与原鸡和鹌鹑对应的氨基酸序列比对同源性均高于92.16％，由此可见禽类的ASIP基因具有高度的保守性，同时也证明了毛囊非伤害性取样的可行性，为禽类毛囊取样的方法提供了一种新的参考。所得序列均已传至GenBank，基因登录号分别为HM059823和HM059824。<br>　　 ⑵根据鸡、鹌鹑、绿头野鸭等AGRP基因同源序列的保守区设计引物，用PCR扩增番鸭，高邮鸭和英系北京鸭基因组DNA，回收目的片段，然后克隆测序。番鸭、高邮鸭和英系北京鸭分别扩增出1213bp、1195bp和1196bp的核苷酸序列，包括2个内含子、外显子2、部分外显子1和部分外显子3。序列比对发现鸭与其他鸡形目禽种相比，AGRP基因编码序列和氨基酸序列同源性较高，但在内含子2上变异较大，鸭与鸡形目物种相比，内含子2少200bp左右。序列经上传所得基因登录号分别为HM059820、HM059821和HM059822。<br>　　 ⑶利用半定量RT-pCR方法检测了ASIP基因和AGRP基因在番鸭毛囊、皮肤毛囊、心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、卵巢(♀)、睾丸(♂)、下丘脑、垂体、肾上腺、尾脂腺、脂肪等共15个组织的表达量。发现ASIP基因在禽类皮肤组织(毛囊和皮肤)和中枢神经系统(下丘脑)及其他非皮肤中均有表达。AGRP基因与ASIP基因一样，在番鸭各组织均存在表达，其中AGRP基因在下丘脑和肾上腺中表达量较高。利用方差分析法比较番鸭皮肤组织(毛囊和皮肤)和中枢神经系统(下丘脑)中ASIP和AGRP基因的表达，结果表明ASIP基因在皮肤和毛囊组织中的表达差异不显著(P＞0.05)，下丘脑中的ASIP基因相对表达量则极显著高于皮肤中的(P＜0.01)，而与毛囊中的表达量相比差异不显著(P＞0.05)。AGRP基因在下丘脑、毛囊、皮肤中均有表达，其中下丘脑中表达量最高，其次为毛囊，最后为皮肤，表达量的差异达极显著水平(P＜0.01)。