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摘要乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是全球范围内慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌的主要成因之一。全世界有1/4的人生活在HBV流行区域,有20亿人是HBV携带者,其中3.5到4亿人为慢性感染者,每年有近100万人死于由HBV引发的肝硬化、肝功能衰竭和肝癌。目前上市的治疗慢性HBV感染的药物有两大类共7种,即免疫调节剂(IFN-α和pegylated IFN-α)和核苷类似物(拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦、替比夫定、泰诺福韦)。这些药物在使用上都存在着一些局限性和毒副作用。cccDNA能稳定存在于细胞内,是停药后反弹的关键所在,然而目前的这些药物都不能直接有效的清除cccDNA,从而无法彻底清除病毒感染。因此,筛选新的抗HBV药物尤其是直接抑制cccDNA形成或是加速其降解的药物对研制新的抗HBV药物极其重要。<br>　　 本文第一章内容是文献综述。首先简要介绍了HBV的病毒结构、基因组、生活史和致病性等。然后综述了HBV抗病毒治疗、抗病毒药物研究进展和新的抗病毒靶点。最后介绍了中草药在治疗慢性HBV感染中的研究与应用。<br>　　 第二章内容是建立基于细胞的抗HBV药物筛选模型,并利用建立的筛选模型对实验室现有的中草药来源的化合物库进行抗病毒筛选。传统研究抗乙肝病毒药物活性的细胞模型主要是采用HepG2.2.15等稳转细胞系,在这些细胞系中HBeAg和HBsAg并不能真实地反映HBV DNA复制水平,所以除了抗原检测还需要进行核酸检测,这种检测方式耗时耗力、成本高,不适合药物的大量筛选。我们采用新的细胞系HepG2.117,此细胞系中HBV的复制受到四环素调控,根据其基因组结构推测HBcAg只能来源于形成的cccDNA,上清的HBeAg可以反映eecDNA水平。通过检测cccDNA和HBeAg的积累动力学,我们发现HBeAg水平与cccDNA含量正相关,上清中的HBeAg可以反映胞内cccDNA水平。利用HepG2.117细胞系,通过摸索各种培养条件,我们建立了适合抗HBV药物筛选的高通量抗乙肝病毒药物筛选细胞模型。利用此模型,我们对中草药来源的化合物进行了抗病毒药物筛选。<br>　　 第三章内容为安石榴苷的抗病毒活性及其抗病毒机制研究。在进行抗病毒药物筛选时,我们筛选到了化合物安石榴苷能有效的抑制HBeAg的分泌,其EC50为12.67μM。我们在HepG2.2.15细胞中确认其抗病毒活性,并在HepG2.117和HepG2.2.15两种细胞系中研究其抗病毒机制。结果发现安石榴苷在HepG2.117和HepG2.2.15两种细胞系中可以剂量依赖地抑制HBeAg的分泌和核内cccDNA形成,而对HBV RNA水平、核心启动子活性、core蛋白以及HBsAg的表达无显著影响。有趣的是,在短时间内安石榴苷对HepG2.117中总的HBV DNA无作用,但随着药物处理时间的延长抑制作用变得更加明显。而在HepG2.2.15细胞中,无论药物作用3天、6天还是9天,安石榴苷都不能减少胞内总的。HBV DNA。这与逆转录酶抑制剂拉米夫定的效果正好相反,我们推测安石榴苷可以直接抑制cccDNA形成。根据文献检索,这是首次发现小分子化合物可以通过直接影响cccDNA的形成而发挥抗病毒作用。