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摘要目的:<br>　　脂质体已经成为生物医药技术领域里，最主要的药物、基因、影像剂的重要载体，是一种非病毒载体类载体，在基因传递中具有显著优势。但仍然存在生物大分子负载率低、摄取效率低、胞内释放性能欠佳、内涵体逃逸障碍等问题。因此，本文重在设计一种多能高效的生物大分子输送载体。<br>　　本文合成了能高效提高转染效率的DC-Chol，以及赋予脂质体pH敏感性能的CHEMS，对其化学结构进行表征。将DSPE-PEG(2000)与CPP共轭连接，得到导向性脂材DSPE-PEG-CPP，以提高脂质体对细胞的摄取能力。构建了一种能使siRNA冲破内涵体逃逸障碍，避免被溶酶体灭活的CPP修饰载压缩物脂质体CL2，和一种CPP修饰的非载压缩脂质体CL1，并对其进行表征和初步的评价。<br>　　方法:<br>　　1.胆固醇氯甲酸酯和过量N，N-二甲基乙二胺分别溶于无醇氯仿中，0-4℃冰水浴条件下反应。TLC监测反应进程，待胆固醇氯甲酸酯反应完全后终止反应（约2h），旋蒸挥干溶剂，干燥后用热绝对乙醇重结晶两次纯化并真空干燥。<br>　　2.胆固醇与过量的丁二酸酐溶于20mL甲苯， DMAP作为催化剂，加热回流反应3h。旋转蒸发挥干溶剂，干燥后重结晶两次，得到灰色产品。<br>　　3.Mal-PEG-DSPE用氯仿-甲醇(3∶1)溶解，旋转成膜，HBS(pH6.5)溶液3.0mL水化，和CPP肽溶液(5mg溶于HBS(pH6.5)2.0mL)混合，搅拌反应48h，加入半胱氨酸适量继续搅拌4h，透析2d，冷冻干燥。<br>　　4.空白脂质体单因素考察，通过固定膜材总量;DOPE∶CHEMS比例的筛选;添加Chol对制剂的影响;水化液选择;超声时间的选择，最终确定空白脂质体制备方法。<br>　　5.构建非压缩载药脂质体(NL1/CL1)和载压缩物脂质体(NL2和CL2)，并进粒径、电位和电镜表征。<br>　　制备方法如下:<br>　　分别以DSPE-PEG、DSPE-PEG(CPP)成膜，DEPC水溶液水化，超声得胶束M1、M2。<br>　　非压缩载药脂质体(NL1/CL1):以SPC/Chol/DC-Chol为脂材成膜，含siRNA的DEPC溶液水化脱膜，水浴超声10-15min，得到普通载药脂质体。通过后插入法分别与胶束M1和M2孵育4h，得NL1和CL1。<br>　　载压缩物脂质体(NL2和CL2):以DOPE/CHEMS/Chol为脂材成膜，DEPC水化液脱膜，超声得空白脂质体，与siRNA压缩物混合孵育后，冰浴条件调至pH7.4-7.8，再通过后插入法制备NL2和CL2。<br>　　6.以流式细胞术分析包载siRNA的NL1&CL1和包载压缩siRNA的NL2&CL2处理的MCF-7细胞，以阳性细胞百分数和胞内平均荧光强度(MFI)为考察指标，评价细胞摄取效率。<br>　　结果:<br>　　1.合成DC-Chol:白色固体粉末1.621g，产率达到60.3％;熔点:107-108℃;TLC(氯仿-甲醇=65∶35(v/v)，10％H2SO4显色），Rf=0.56，显示为纯品;质谱图中m/z501.6，与DC-Chol的理论计算值501.80(M+H+)相符;1HNMR:δ,2.301(s,6H);δ,2.495(t,2H);δ,3.305,3.296(q,2H);δ，5.365（s，1H）。证明产物结构正确。<br>　　2.合成CHEMS:将无水乙醇重结晶干燥后，得到浅灰色固体粉末0.49g，产率78％;熔点:173-176℃;TLC测定(氯仿∶甲醇(10∶1，v/v)，新生成斑点Rf=0.10，显示为纯品;质谱图中有离子峰m/z485.5，与CHEMS的理论计算值为485.5（M-H+）相符。证明产物结构正确。<br>　　3.合成DSPE-PEG-CPP:得到白色絮状物;通过Ellman试剂测得CPP反应率为84.4％; MS+检测，分子离子峰m/z4469.17，与设计肽平理论计算值相对应。证明产物为目标化合物为DSPE-PEG-CPP。<br>　　4.通过单因素考察，确定脂质体制备工艺:<br>　　精密量取DOPE、CHEMS、Chol按5∶2∶2(mol/mol/mol)成膜，加入37℃DEPC水溶液2.0mL水化，超声10-15min，得到带有淡蓝色乳光的半透明体系，测粒径。<br>　　5.构建了非压缩载药脂质体(NL1/CL1)和载压缩物脂质体(NL2和CL2)，并进粒径、电位和电镜表征。<br>　　NL1、CL1的粒径分别为226.8nm、262.4nm;后者PdI较小，粒径分布窄;Zeta分别为37.0mV、55.7mV，体系稳定;电镜下观察，粒径约200nm左右。<br>　　NL2、CL2粒径分别为289.8nm、293.2nm;两组制剂PdI都很小，粒径分布窄;Zeta分别为-29.6mV、-29.2mV，脂质体表面带负电，体系趋于稳定;电镜下观察，粒径约200nm左右。<br>　　6.采用流式细胞分析术分析经药物制剂处理的细胞悬液<br>　　非压缩制剂组N-L和C-L进入细胞的荧光强度X-mean分别为9.1，10.4，是阴性对照组和游离siRNA组的20倍左右，由此说明CPP修饰非压缩载药脂质体（C-L制剂）、普通修饰非压缩载药脂质体(N-L)均提高了细胞摄取率，CPP修饰非压缩载药脂质体具有更高的细胞摄取率。<br>　　载压缩物制剂组N-L'、C-L'阳性细胞百分比为6.4％、7.9％，其阳性细胞百分数均有显著变化，提高细胞摄取效率约10倍，表明载压缩物制剂均提高了细胞摄取效率，CPP修饰载压缩物脂质体具有更高的细胞摄取率。<br>　　结论:<br>　　实验结果表明，DC-Chol以及CHEMS合成路线可靠，产率分别为60.3％、78％，产品纯度较高，重现性高。<br>　　由Ellman试剂判断反应进程，质谱测定得出的分子离子峰推测产物结构，成功地将CPP共轭连接到DSPE-PEG(2000)中的PEG远端，得到增强细胞穿透能力的导向性脂材DSPE-PEG(2000)-CPP。<br>　　成功地制备了四组递送siRNA的递送纳米脂质载体CPP修饰非压缩载药脂质体(NL1)、普通修饰非压缩载药脂质体(NL2)、普通修饰在压缩物脂质体(CL1)、CPP修饰载压缩物脂质体(CL2)。<br>　　四组制剂均提高了细胞摄取效率。普通脂质体与CPP修饰的脂质体的细胞摄取相对较高，但差异并不显著。导致这个结果的可能的原因是，如DSPE-PEG-CPP合成产物中有较多剩余脂材原料，反应条件有待进一步优化，产物纯度有待提高。