换一批摘要该课题利用基因重组技术对GFP基因进行了克隆和初步的表达研究.首先,优化了PCR扩增GFP基因的程序.将GFP基因重组到PBV220表达载体上,并转化E.colidh5α宿主菌,快速鉴定筛选到重组子,成功地构建了GFP基因工程菌,命名为e.coliPGPI.将得到的重组质粒用PCR和酶切鉴定,凝胶电泳图谱与预计一致.在倒置型荧光显微镜下观察经诱导表达的E.colipgpI活体,在460~480nm范围的激发光波长下,可以看到菌体发现明亮的红色荧光,发射光波长在518nm附近.而用荧光分光光度计分析的结果是,E.coliPGPId474nm处有最大且唯一吸收峰,激发光波长为518nm,与荧光显微镜的观察结果一致.SDS-PAGE表明:GFP蛋白在E.coliPGPI中诱导表达的形式民为胞内可溶蛋白,分子量29kDa.诱导表达研究表明:在30℃培养6小时进入对数生长期时开始升温诱导的效果最好;蛋白表达集中在诱导初期,诱导3~4小时表达效果最好;28代的连续培养基因工程菌E.coliPGPI表达的稳定率为55﹪.基因工程生长曲线表明:外源GFP基因的导入对宿主的生长没有明显的影响.
更多相关知识
- 浏览297
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
