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摘要背景和目的：紧密连接主要存在于上皮细胞、内皮细胞之间的连接复合体中，使相邻细胞膜紧靠在一起，形成环绕细胞的物理屏障结构，具有封闭上皮细胞间隙，防止可溶性物质从细胞一侧扩散到另一侧的屏障功能，同时把上皮细胞分成顶侧的脂质成分和基底侧的蛋白质成分两个不同的功能区。 本研究所检测的ZO-1和ZO-2属于紧密连接复合体的一部分。我们通过检测ZO-1和ZO-2的mRNA在人类食管鳞癌和正常食管鳞状上皮中的表达差异，来探讨ZO-1和ZO-2与食管鳞癌的发生和转移之间是否存在关系。 另外，本研究通过对不同分化程度的人类食管鳞癌中ZO-1和ZO-2的mRNA的表达差异，来探讨ZO-1和ZO-2的表达量是否可以预测食道鳞癌的分化程度。 本研究中，我们将人类食管非癌细胞株(NE-1)与不同浓度的烟草乙醇提取物(Ethanolextract,EE)共同孵育，分别于12小时、24小时和48小时加入噻唑蓝并进行吸光度检测来观察细胞增殖的变化。 材料和方法：用逆转录聚合酶链反应法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测食管鳞癌患者液氮冻存的食管鳞癌组织和正常食管鳞状上皮组织标本ZO-1和ZO-2的mRNA的表达。 逆转录聚合酶链反应法：从组织提取总RNA，并用5μg总RNA逆转录成cDNA。然后取2μLcDNA加入常规PCR扩增体系进行扩增。最后将PCR产物在琼脂糖凝胶中电泳并进行检测。 实时荧光定量聚合酶链反应法：取经逆转录聚合酶链反应法获得的cDNA2μL与2×SYBRGreenPCRMasterMix10μL于20μL反应体系中进行扩增，反应结束后，进行熔解曲线分析。 噻唑蓝法：将细胞种植于96孔板培养24小时，然后加入不同浓度的烟草乙醇提取物共同孵育12、24、48小时，最后加入噻唑蓝并进行吸光度检测。 结果：本研究中，所有的食管鳞状细胞癌组织和正常食管组织均呈ZO-1和ZO-2mRNA的阳性表达，况且所有食管鳞状细胞癌组织中ZO-1和ZO-2的表达量均较正常食管上皮显著下降，差异具有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。 在低分化的食管鳞状细胞癌组织中ZO-1和ZO-2的表达量均较中分化的食管鳞状细胞癌组织降低，但二者之间的差异不具有统计学意义(P=0.352，P=0.450)。 浓度为10μg/mL和20μg/mL的EE随着孵育时间的延长能够促进人类食道非癌细胞株的增殖，而浓度为40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL和100μg/mL的EE能够抑制人类食道非癌细胞株的增殖。 结论： 1.ZO-1和ZO-2mRNA的表达广泛存在于人类食管鳞癌和正常食管上皮中。 2.ZO-1和ZO-2在人类食管鳞状细胞癌组织的表达量均较正常食管上皮有显著下降，ZO-1和ZO-2可能与人类食管鳞状细胞癌的发生和转移有密切的关系。 3.随着人类食管鳞状细胞癌细胞分化程度的降低，ZO-1和ZO-2的表达量并未随之显著降低，因此尚不能说明根据ZO-1和ZO-2的表达量可以预测人类食管鳞状细胞癌的分化程度。 4.浓度为10μg/mL和20μg/mL的EE能够促进人类食道非癌细胞株的增殖。