换一批摘要目的：利用含有人的SY1的pBluescriptR质粒，构建重组体，并用重组体转染原核细胞表达含SY1的融合蛋白，以此融合蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠，制备单克隆抗体，为将来进一步研究该基因的功能打好基础。 方法：用PCR扩增SY1的cds序列，限制性内切酶酶切，构建到pET28a(+)中，酶切、测序等鉴定后，重组体转化大肠杆菌，IPTG诱导重组蛋白表达，在变性条件下经Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化目的蛋白。WesternBlot方法检测重组蛋白的表达，用纯化的SY1蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞，采用常规杂交瘤技术方法制备杂交瘤细胞，克隆化筛选阳性细胞克隆，制备单克隆抗体。间接ELISA试验鉴定单克隆抗体并检测单克隆抗体的效价。 结果：成功构建出pET28a(+)-SY1重组质粒，SDS-PAGE显示SY1融合蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在，WesternBlot方法检测到融合蛋白的表达，发现有相对分子量为41KD的特异条带。以经过纯化的SY1蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠，通过ELISA方法鉴定单克隆抗体构建成功。 结论：成功构建原核表达载体pET28a(+)-SY1，在原核细胞中表达成包涵体，这种包涵体可以作为抗原并成功制备出相应的单克隆抗体。该单克隆抗体的制备成功，为深入研究SY1的功能提供了有力工具。
更多相关知识
- 浏览53
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
