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摘要应用CIAV的标准毒株，通过不同的培养方法进行病毒繁殖，测定病毒含量，并利用浓缩技术对细胞毒进行了浓缩，使用1日龄SPF鸡进行了致病性试验。结果表明，CIAV可经MDCC-MSBl细胞或鸡胚或1日龄鸡三种方法繁殖，以细胞繁殖的病毒含量最高，经浓缩后，病毒含量可以达到106.4TCID50／0．1ml。致病性试验表明，CIAV引起胸腺萎缩、骨髓黄化和血液稀薄等临床病变。 根据Genbank上发表的CIAV基因全序列，将Cux一1株、Gifu-1株和China株进行基因序列比较，根据保守区的序列，设计合成一对特异性引物，按标准反应体系装配反应，应用梯度PCR选择引物最佳的退火温度为59℃，经试验选择最佳的镁离子浓度为1．5mM，并对其它的反应条件进行了优化。该对引物与MDV、POX、ILTV等DNA病毒和正常细胞DNA没有交叉反应，使用CIAVCux～l株、Gifu-1株和TK5803株感染的细胞、鸡胚组织提取的DNA作为模板进行PCR扩增，均可以扩增出特异条带。使用不同含量的DNA为模板进行PCR扩增，结果表明DNA含量在1Opg／ul以上和病毒含量在10-1.6TCID50。以上时，可以扩增到特异性条带。将PCR产物纯化后与pGEM—Teasy载体连接，将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中，经含Amp的培养基进行蓝、白斑筛选，成功地筛选出阳性重组子。利用质粒PCR扩增法鉴定阳性重组子，证实了重组的正确性。取阳性质粒DNA进行序列测定分析，结果表明所获得的克隆序列与三株病毒的相应序列之间的同源性分别为98．6％，98．2％和94．6％。 使用浓缩的肝脏组织毒免疫SPF鸡制备高免血清，经硫酸铵沉淀后提取IgG，建立了检测CIAV的间接免疫荧光试验。将接毒细胞离心后制成细胞涂片，对购入的异硫氰酸标记的羊抗鸡IgG和提取的抗CIAVIgG工作浓度进行标定，结果表明提取的抗CIAVlgG作1：40稀释，荧光二抗作1：1000稀释，可以检测到病毒感染细胞特异的颗粒状荧光。敏感性试验证明，最低可以检测到100.4TCID50病毒感染的细胞涂片。 采用本实验建立的PCR方法和间接免疫荧光方法对国内外不同兽用生物制品厂生产的¨0批禽用活疫苗进行了检测，结果用PCR方法检测到9批阳性，间接免疫荧光抗体试验检测到8批阳性，说明疫苗中存在CIAV的污染。