换一批摘要目的：多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族是催化0-糖链起始反应的第一步酶，其活性与肿瘤密切有关。本文旨在建立酵母双杂交技术平台，并对多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2结构与功能关系进行初步研究。方法：1．利用PDB数据库寻找ppGalNAcT2模版，并用SWISS-MODEL服务器对ppGalNAcT2进行空间结构模拟，对结果进行优化及PROCHECK检测。2．利用PCR方法重组构建pGADT7一T2、pC-ADTT-T2F、pGADT7一T2R酵母双杂交载体，醋酸锂法转化酵母AHl09菌株，并进行激活检测。3．利用RT—PCR方法从人类胃癌SGC7901细胞中克隆出基质金属蛋白酶14的铰链区，并用酵母双杂交方法验证ppGalNAcT2与MMPl4的铰链区结构相互作用。结果：成功对ppGalNAcT2进行同源模拟。构建了pGADT7一T2、pGADT7-T2F、pGADT7一T2R酵母双杂交载体，并通过激活检测，建立酵母双杂交技术平台。从SGC7901细胞中克隆出MMPl4铰链区结构，构建了MMPl4H-pGBKT7载体，对ppGalNAcT2和IVlMPl4铰链区进行酵母双杂交验证，结果成阴性。结论：ppGalNAcT2催化区包括三个结构域。ppGalNAcT2通过激活检测，能够用于酵母双杂交实验。ppGalNAcT2与MMPl4铰链区酵母双杂交实验的阴性结果表明，ppGalNAcT2作为蛋白质与~VIPl4铰链区可能无稳定的相互结合作用：但是作为一个酶，是否催化MMPl4铰链区的0一糖基化，有待于进一步的深入研究。
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