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摘要目的：制备具有满足临床应用所需纯度和生物学活性的重组人血管抑素(rhAS)，并研究其对血管内皮细胞作用的特异性。 方法：转化pQE30(Angiostatin)至大肠杆菌E.Coli(M15)得到表达rhAS的基因工程菌(E.ColiM15/pQE/AS)，并对其发酵条件进行优化；对rhAS包涵体纯化、变性复性等条件进行优化研究并鉴定其纯度；制备得到的rhAS在人微血管内皮细胞(HMEC-1)、鸡胚尿囊膜(CAM)及荷人胰腺癌裸鼠模型上进行其生物学活性及体内药效学评价；建立测定人血浆血管抑素的ELISA方法并进行初步应用；采用流式细胞术(FCM)、rhAS-Sepharose4B亲和层析、99Tcm标记显像、放射自显影及组织形态学分析等技术对HMEC-1细胞、S180肿瘤和Matrigel模型等进行了rhAS的受体及其作用特异性的系列研究。 结果：经转化的基因工程菌可由IPTG诱导表达rhAS，其最佳发酵条件为菌体A600nm为0.8～1.0时进行诱导，加入诱导剂IPTG的终浓度为0.1mmol/L，加入诱导剂后培养时间为6h。rhAS包涵体纯化的最佳方法为：0.2％脱氧胆酸钠→去离子水→2mol/LGu·HCl；rhAS变性复性最佳条件为：按1∶10(w/v)加入变性缓冲液(8mol/LGu·HCl，15mmol/LDTT)，然后将Gu·HCl变性液按1∶15(v/v)加入缓冲液稀释，再按1∶10(v/v)对含GSH(1mmol/L)：GSSG(0.1mmol/L)氧化还原对的缓冲液进行透析复性。rhAS既可抑制HMEC-1细胞的增殖，也可诱导其凋亡；可明显抑制CAM上血管的生成和有效地抑制人胰腺癌的生长。建立了可行的测定人血浆血管抑素的ELISA方法。采用rhAS-Sepharose4B亲和层析法得到了一系列HMEC-1细胞上的rhAS结合蛋白，其中ATP合酶α/β亚基及Actin为AS受体。HMEC-1细胞、S180肿瘤及Matrigel模型均可特异地结合rhAS。结论：通过对基因工程菌发酵条件、rhAS包涵体纯化、变性复性等条件的优化研究，得到了一条得率高，成本低，方法简便，产品生物活性高，并可规模化放大的rhAS制备工艺。亲和甑别技术的建立为研究其它药物的相关细胞受体提供了一个可行的平台。HMEC-1细胞、S180肿瘤及Matrigel模型与rhAS的特异结合表明rhAS对新生血管具有作用特异性。