换一批CRL F2实时定量PCR检测方法的建立及初步应用
Establishment and preliminary application of real time PCR assay for quantitative detection of CRLF2
摘要目的：建立人细胞因子受体样因子2（CRLF2）实时定量 PCR检测方法。方法设计特异性引物扩增目的基因CRLF2及管家基因ABL ，将纯化的PCR产物进行TA克隆，经菌落PCR筛选并测序鉴定后，提取重组质粒DNA ，紫外分光光度计检测浓度换算成copies／mL浓度，稀释制备成质粒标准品，制作标准曲线观察灵敏度和线性范围，同时对质粒标准品的稳定性进行评估。初步应用该方法检测10例健康儿童和10例急性淋巴细胞白血病（ALL）初诊儿童的骨髓单个核细胞CRLF2水平。结果 CRLF2 PCR产物具有单一特异的熔解曲线；标准品的线性检测范围为103～108 copies／mL ；质粒标准品反复冻融3次仍旧稳定；临床标本的 CRLF2水平均在标准品线性检测范围。结论该实验室建立的 CRLF2实时定量 PCR检测方法具有良好的特异性、线性范围和稳定性，可应用于临床 ALL 儿童CRLF2基因的定量检测。
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关键词
实时定量聚合酶链反应急性淋巴细胞白血病细胞因子受体样因子2质粒标准品real-time quantitative polymerase chain reactioncytokine receptor-like factor 2acute lymphoblastic leukemiaplasmid standard substance
医学主题词
方法(Methods)质粒(Plasmids)受体, 细胞因子(Receptors, Cytokine)前体细胞淋巴母细胞白血病淋巴瘤(Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma)聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.005
发布时间
2016-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江西省自然科学基金（20114BAB215031）
江西省卫生计生委科技项目（20141152）
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