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人FUT3基因真核表达载体的构建与表达

Construction of human FUT3 eukaryotic expression vector and its expression in human breast adenocarcinoma cells

摘要:

目的:构建增强型绿色荧光蛋白为报告基因的pEGFP-C1-FUT3真核表达载体,分析其在细胞系MDA-MB-231中的表达.方法:采用RT-PCR扩增FUT3全长基因片段,克隆至pMD18-T载体进行测序分析,将FUT3亚克隆至pEGFP-C1表达载体并酶切鉴定.利用脂质体将重组真核表达栽体pEGFP-C1-FUT3转染入人乳腺癌细胞MDA-MB-231中,经G418筛选获得稳定转染的细胞系,荧光显微镜观察及RT-PCR检测FUT3的表选.结果:成功获得人全长FUT3基因并构建了真核表达栽体pEGFP-C1-FUT3,体外转染MDA-MB-231细胞后荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,半定量RT-PCR检出高水平表达的FUT3.结论:成功构建了增强型绿色荧光蛋白为报告基因的FUT3真核表达载体,并在MDA-MB-231中稳定表达,为进一步研究FUT3的生物学功能提供基础.

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作者: 岳丽玲 [1] 樊丽 [2] 刘吉成 [2]
分类号: R3
栏目名称: 基础研究
DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2009.31.005
发布时间: 2010-03-05
基金项目:
国家自然科学基金 黑龙江省青年科学资金资助项目
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