换一批幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因UreI载体的构建、融合表达及纯化
Construction urea channel protein (UreI) of human Helicobacter pylori and expression in E.coli
摘要目的 构建幽门螺杆菌(H.pylori, Hp)尿素通道蛋白基因UreI的融合表达载体,并在E.coli BL21中表达,为进一步研究UreI的功能奠定基础.方法 利用分子克隆技术以Hp DNA染色体为模板,扩增Hp UreI基因片段,将目的 基因UreI与载体pET32a(+)分别经kpnⅠ和HindⅢ双酶切,纯化,连接.筛选阳性重组载体,转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达pET32a(+)/UreI融合蛋白.表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用SDS-PAGE及Western blot分析.结果 经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp UreI编码基因,由585bp组成,与GenBank相应菌株HP AM417609序列完全一致,无碱基突变.经SDS-PAGE分析显示重组质粒pET32a(+)/UreI在原核细胞中得到了高效融合表达,其重组融合蛋白分子量为130ku,经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上,Western blot分析显示,该重组融合蛋白可被6-His鼠抗单克隆抗体所识别,具有良好的反应原性.结论 成功地克隆和构建了原核表达载体pET32a(+)/UreI,并在原核细胞中得到了高效融合表达.
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