换一批刚地弓形虫棒状体蛋白17基因的克隆、表达及抗原性分析
Gene-cloning, Expression and Antigenicity Analysis of Rhoptry Protein 17 of Toxoplasma gondii
摘要目的 克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株棒状体蛋白17(TgROP17)基因,并分析其抗原性.方法 制备弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgROP17基因全长编码序列(GenBank登录号为AM075203.1)的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pGEX-6P-1载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序.将重组质粒pGEX-6P-1-TgROP17转化至E.coli Rosetta (DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物.分别以兔抗弓形虫血清和抗谷胱甘肽S转移酶(GST)标签抗体为一抗,采用蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白及其抗原性. 结果 RT-PCR扩增产物约为1 850 bp.菌落PCR、双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX -6P-1 - TgROP17构建成功.SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约96 000的可溶性重组蛋白.Western blotting结果表明,诱导表达的蛋白质为带GST标签的重组蛋白,且能被兔抗弓形虫血清识别.结论 获得刚地弓形虫重组ROP17蛋白,且具有抗原性.
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