γ-H2AX分析用于检测电离辐射致HepG2细胞DNA双链断裂的研究
γ-H2AX assay as a measurement of DNA double-strand breaks in irradiated HepG2 cells
摘要目的 应用γ-H2AX分析检测电离辐射导致肝癌细胞株HepG2基因组DNA双链断裂的情况,并检测在不同细胞周期时相中的表达差异,从而了解不同时相HepG2细胞株的辐射敏感性.方法 利用胸腺嘧啶核苷(TdR)阻断HepG2细胞于G1期末,于不同时间点分别得到同步化的S期和G2/M期细胞,用60Coγ射线照射细胞,建立DNA双链断裂模型,采用免疫荧光法和Westernblotting检测γ-H2AX的表达.结果 TdR阻断后继续培养至34和40 h,分别得到了较高同步化程度的S期和G2/M期HepG2细胞;受照后的HepG2细胞中γ-H2AX表达较照射前显著增高,处于S期的细胞γ-H2AX表达增加更为突出.结论 不同周期时相的HepG2细胞受照后均检测出不同程度的DNA双链断裂,其中S期细胞尤为敏感.γ-H2AX对DNA双链断裂快速敏感的反应使γ-H2AX分析在检测早期DNA双链损伤中具有广泛的应用前景.
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