换一批SARS冠状病毒核衣壳蛋白的克隆表达及其临床应用研究
Molecular cloning and expression of the severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus nucleocapsid protein and its clinical application
摘要目的克隆、原核表达严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳(N)蛋白,分析、评价其抗原性和在SARS血清学诊断中的应用价值.方法采用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested-PCR)扩增SARS-CoV的N蛋白基因,克隆入pBAD/Thio-TOPO原核表达载体,表达、纯化重组融合N蛋白,Western Blot分析其抗原性和特异性,建立以重组N蛋白为抗原的酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并与以全病毒裂解液为抗原的ELISA法进行比较.结果重组表达载体经诱导产生了高水平的重组融合N蛋白,融合蛋白经亲和纯化后,具备了较高的纯度和抗原反应性,以重组蛋白为抗原的ELISA法在特异性和敏感性方面优于以全病毒裂解液为抗原者.结论重组SARS-CoV的N蛋白具有良好的抗原性和特异性,可作为新一代SARS-CoV抗体检测试剂盒的备选抗原.
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主题词
蛋白(Egg White)抗原(Antigens)病毒(Viruses)严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome)酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
分类号
R3
栏目名称
DOI
10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2005.01.019
发布时间
2005-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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