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【中文期刊】 苑丽娜 王定和 等 《生物技术通讯》 2011年22卷6期 864-866页ISTICCA
【摘要】 目的:建立一种适用于酵母双杂交系统的简便快捷的酵母质粒提取方法.方法:以酿酒酵母为供试材料,用玻璃珠振荡法破除酵母细胞壁,提取酵母总DNA,最后通过电转化大肠杆菌DH10B获得目的质粒.结果:粗提得到的质粒可直接转化DH10B,作为模板用于...
- 概要：
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【中文期刊】 熊福银 林艳丽 等 《生物技术通讯》 2009年20卷3期 386-387页ISTICCA
【摘要】 目的:建立一种经济有效、快速简便、稳定的提取酵母质粒的方法.方法:用葡糖苷酸酶消化酵母细胞壁以获取原生质体,然后采用碱裂解法裂解原生质体以获得质粒.结果:与采用商品化离心柱法试剂盒所提取的质粒相比,用该法获取的酵母质粒在PCR分析及转化效果...
- 概要：
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【中文期刊】 张怡 刘坤 等 《食品与生物技术学报》 2013年32卷11期 1194-1198页
【摘要】 质粒提取是遗传工程操作的重要步骤.酵母细胞壁坚韧,不易破壁,使酵母质粒提取变得非常困难.为了获得一种快速、简便、高效、稳定的提取酵母质粒的方法,利用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白测定仪和PCR扩增等方法,对玻璃珠液氮法、蜗牛酶法和试剂盒法提取的酵...
- 概要：
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【中文期刊】 刘国强 孙文浩 等 《生物学杂志》 2020年37卷2期 10-13页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)是应用最为广泛的外源蛋白表达系统之一.目前使用最多的外源蛋白表达策略是使用整合型质粒;游离型质粒由于其高不稳定性,在毕赤酵母中的应用受到极大的限制.将ARS/CEN等元件连接到pPIC9K载体...
- 概要：
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【中文期刊】 战映璇 王环 等 《精准医学杂志》 2022年37卷4期 342-346页
【摘要】 目的 利用巴斯德毕赤酵母获得具有可溶性、免疫原性的重组PD-L1蛋白.方法 根据巴斯德毕赤酵母表达系统的密码子使用偏好,优化人PD-L1基因序列,将优化后的序列构建至质粒pPIC9K,合成重组质粒pPIC9K-PDL1.使用SacⅠ-HF将...
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【中文期刊】 凌小雅 贾瑞璞 等 《黑龙江畜牧兽医》 2021年10期 5-9页
【摘要】 为了研究猪红细胞CR1-like与补体片段C3b的互作关系,试验构建符合酵母双杂交系统要求的重组质粒pGADT7-C3b,对合成的含C3b基因片段的质粒进行双酶切鉴定,运用基因重组技术将鉴定正确的C3b基因与表达载体pGADT7 连接并转化...
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【中文期刊】 单颖 吴学敏 等 《微生物学杂志》 2014年34卷3期 61-65页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 探讨人防御素6(HD-6)在毕赤酵母中表达的可行性,为进一步研究HD6的功能提供理论依据和实验基础.采用PCR方法,设计引物从cDNA文库中扩增出人α防御素6基因片段,并将其插入到克隆载体pMD-18T中,再与毕赤酵母表达载体pPICZαA...
- 概要：
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【中文期刊】 孙静 贾奋 等 《华西口腔医学杂志》 2012年30卷2期 115-118页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建能够稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的白色假丝酵母菌菌株,以便对目的基因进行示踪.方法 构建pACT1-GFP质粒,以白色假丝酵母菌CAI4菌株作为感受态进行转化培养后,分别观察绿色荧光蛋白在两相型下的表达情况.结果 含有pACT1...
- 概要：
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【中文期刊】 马建荣 余永红 等 《生物学杂志》 2011年28卷5期 60-64,69页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 采用PCR的方法对AGAP(anti-cancer analgesic peptide,抗癌镇痛肽)的N端进行了基因改造,保留了Kex2初步切割信号序列,去除了Ste13的切割序列,加入了对蝎毒蛋白抗癌镇痛活性无影响的氨基酸作为linker...
- 概要：
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【中文期刊】 黄宪章 张战锋 等 《实用医学杂志》 2011年27卷16期 2917-2919页ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的胞外分泌型pPICZαA-CDK2重组质粒,利用毕赤酵母表达体系表达CDK2蛋白.方法:从人白细胞中提取总RNA,逆转录后采用聚合酶链反应扩增出CDK2基因,并将其插入pPICZαA质粒,构建...
【关键词】 细胞周期蛋白依赖激酶2；重组质粒；毕赤酵母；
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【中文期刊】 封建凯 孙万邦 等 《生物技术通报》 2010年3期 168-172页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 构建重组hIL-10真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达,为进一步研究hIL-10生物学功能及临床应用奠定基础.PCR扩增目的基因hIL-10cDNA,经EcoR I/Xba I双酶切后,将其亚克隆至同样双酶切的载体pPICZaA中,构建表...
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【中文期刊】 吕渭辉 庄俊华 等 《南方医科大学学报》 2010年30卷8期 1841-1843页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建白介素1受体Ⅰ型细胞外基因(可溶性白介素1受体Ⅰ型,sIL-1R Ⅰ)的pPICZαA-sIL-1R Ⅰ重组表达载体,利用毕赤酵母表达技术表达sIL-IR Ⅰ蛋向.方法 采用RT-PCR技术扩增基因sIL-1R Ⅰ.经酶切连接构建...
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【中文期刊】 霍丽蓉 邹俊华 等 《中国组织工程研究与临床康复》 2010年14卷20期 3714-3717页ISTICPKUCA
【摘要】 背景:酵母双杂交系统3是目前最常用的筛选相互作用蛋白质的技术平台.目的:运用酵母双杂交系统3筛选人源核不均一核糖核蛋白E1的相互作用子.方法:构建酵母细胞表达载体hnRNP E1-pGBKT7/c-myc,转化酵母菌AH109,Wester...
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【中文期刊】 曹莹 王卫国 等 《南方医科大学学报》 2009年29卷4期 652-655页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 对人端粒酶RNA进行多位点的突变并构建该突变体的酵母三杂交诱饵质粒,且进行毒性检测.方法 根据人端粒酶RNA(hTR)序列及突,变位点设计引物,运用重叠延伸PCR法埘hTR基因的第41位、第80位及第102位碱基进行T→A突变,将突变...
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【中文期刊】 和东芹 肖冬光 等 《微生物学报》 2008年48卷2期 147-151页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 设计含有与面包酵母(Saccharomyces cerevisiae BY-6)编码酸性海藻糖酶ATH基因内部部分序列同源的长引物,以质粒pUG6为模板进行PCR构建带有Cre/loxP系统的敲除单元,转化面包酵母获得G418阳性克隆.将铜...
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【中文期刊】 李蕾 邹先彪 等 《中国感染控制杂志》 2008年7卷4期 233-236页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶真核表达质粒pcDNA3.1/SAP2,为以其作为基因疫苗进行免疫动物实验奠定物质基础.方法 从白假丝酵母菌中提取基因组DNA,以其为模板采用聚合酶链反应(PCR)法获取SAP2基因,将真核表达质粒peD...
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【中文期刊】 陈静 孙红颖 等 《浙江大学学报（医学版）》 2008年37卷2期 126-133页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:在毕赤酵母中高效分泌表达人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白.方法:利用PCR技术获得HSA和PTH(1-34)基因,以柔性连接肽相连插入到表达载体pPIC9,重组质粒线性化后,用化学法转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺陷型培养板...
【关键词】 毕赤酵母；甲状旁腺激素肽(1-34)；血清白蛋白；
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【中文期刊】 谢荣华 吴翔 等 《中国病原生物学杂志》 2007年2卷2期 115-117页ISTICPKUCSCD
【摘要】 目的 构建弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)的酵母表达质粒,为进一步研究GRA1蛋白功能奠定基础.方法 PCR扩增编码GRA1目的基因,用EcoRⅠ/NotⅠ分别对扩增产物和酵母表达质粒pPIC9K进行双酶切,将GRA1定向克隆到pPIC9...
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【中文期刊】 郭建强 李运敏 等 《生物工程学报》 2006年22卷2期 237-242页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 用PCR方法扩增来源于极端嗜热厌氧古菌Pyrococcus furiosus中的超耐热酸性α-淀粉酶的结构基因,将该结构基因引入载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-Amy转化大肠杆菌DH5α细胞,测序结果表明,克隆到的α-淀粉酶结构...
- 概要：
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- 结论：
【中文期刊】 罗星 张峪涵 等 《中国公共卫生》 2006年22卷4期 444-445页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的构建和转化神经突起因子(Neuritin)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究Neuritin的功能及作用机制奠定基础.方法用PCR扩增neuritin全长cDNA中编码开放读框的基因片段;将该基因片段与pLex-A载体定向重组;用...
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