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【中文期刊】 王瑶 许杨 等 《微生物学通报》 2015年42卷4期 699-711页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 [目的]传统采用的λ-Red体系在大肠杆菌染色体上进行基因敲除/整合操作时存在操作繁琐、假阳性率高、多基因连续敲除/整合不稳定等问题.本研究基于上述问题建立一种便于基因构建、高筛选效率(100％)、具有统一技术步骤的λ-Red敲除/整合系统...
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【中文期刊】 张旻 姜绍通 等 《生物工程学报》 2015年31卷8期 1203-1218页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为了建立适合米根霉的遗传转化体系,应用重叠延伸PCR的方法构建了以潮霉素B抗性为选择标记的单交换整合型表达载体pBS-hygro-ldhA;分别采用PEG/CaCl2介导的原生质体转化、原生质体电转化及萌发孢子电转化的方法将表达载体pBS-...
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【中文期刊】 左颀 赵心清 等 《生物工程学报》 2014年30卷4期 669-673页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 染色体整合表达可获得稳定遗传的基因工程菌,是工业酿酒酵母育种的重要手段.pAUR135整合载体是抗生素标记基因可循环使用的载体,添加特定的同源臂后可构建在酵母染色体上稳定遗传的菌株.目前对酵母菌的分子育种常需要对多个基因进行过表达,利用pA...
【关键词】 同源重组；pAUR135整合载体；工业酿酒酵母；
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【中文期刊】 张丕桥 王继红 等 《生物工程学报》 2009年25卷5期 686-694页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为研究重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rLj-RGD3的抗肿瘤活性,确定其生物学地位及意义,本研究提取成体七鳃鳗(Lampetra japonica)口腔腺组织总RNA,经RT.PCR获得cDNA序列长度为357 bp的目的基因片段,将其克隆于pET...
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【中文期刊】 杨玉梅 张坤晓 《生物技术通报》 2023年39卷8期 159-164页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 旨在构建人AAVS1位点定点敲入的诱导表达型ERK-SPARK激酶荧光探针的人食管鳞癌细胞株(KYSE-150).根据AAVS1 位点的DNA序列设计和已公开ERK-SPAEK荧光探针碱基序列构建了两端带有 750 bp同源臂的诱导型ERK...
【关键词】 CRISPR/Cas9；AAVS1 安全港；同源重组；
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【中文期刊】 刘晓燕 祝振亮 等 《生物技术通报》 2023年39卷5期 77-91页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 乳腺生物反应器是指将外源基因导入动物基因组并在动物乳腺中特异性表达,利用动物乳腺合成、分泌蛋白的功能,在其乳汁中获得外源蛋白的技术.乳腺生物反应器凭借其高表达、低成本以及合成蛋白质的结构接近天然蛋白质等优势而被视为药用和营养蛋白生产的一次技...
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【中文期刊】 周敏雅 陆睿 等 《生物技术通报》 2019年35卷5期 85-92页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 设计了以hSOD1、hSOD3为编码序列,以山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动增强子构建乳腺特异性表达载体rhSOD1、rhSOD3,共转染母山羊胎儿成纤维细胞,采用PCR和扩增产物序列分析筛选获得SOD1/3克隆细胞株,应用体细胞核移植(SC...
【关键词】 重组人超氧化物歧化酶；乳腺特异性表达；转基因山羊；
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【中文期刊】 高庆华 董聪 等 《生物技术通报》 2018年34卷7期 174-179页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 通过单独表达蛋白质分子伴侣二硫键异构酶(PDI)和共表达PDI和内质网氧化还原酶(Ero1),提高重组葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的分泌表达.将构建的蛋白质分子伴侣表达载体pPICZ/PDI和pPICZ/Ero1-PDI线性化后,电击转化重组毕...
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【中文期刊】 杨何宝 胡美荣 等 《生物技术通报》 2018年34卷6期 134-140页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 通过筛选5个不同的信号肽基因(AmyE、AprE、NprE、SacB、YncM)代替对照质粒pHT43-npr上原始的信号肽基因,整合2个不同的分子伴侣(PrsA、DnaK)到pHT43-npr质粒上,构建重组质粒并转化到枯草芽孢杆菌WB8...
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【中文期刊】 孙海烨 张梁 等 《生物技术通报》 2017年33卷6期 197-206页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 以增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)为报告基因评价不同启动子在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)中的转录功能,寻找高效表达外源蛋白的启动子.以改造后载体pKLAC1*为基础,PCR克隆来源于K.lactis、酿酒酵母...
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【中文期刊】 车洁 赵晓菲 等 《疾病监测》 2017年32卷10期 878-882页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 建立一种快速、准确检测细菌中ISCR1复合型Ⅰ型整合子的MGB探针二重实时荧光PCR方法.方法 根据ISCR1复合型Ⅰ型整合子中int1基因和ISCR1元件序列设计特异性引物和探针,在多种经常携带有2种多耐药相关基因元件的细菌中检测其...
【关键词】 ISCR1复合型Ⅰ型整合子；int1基因；ISCR1元件；
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【中文期刊】 金城 《微生物学通报》 2012年39卷6期 872页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 突变库容量和高通量筛选方法是影响酶分子定向进化的两个决定因素,虽然巴斯德毕赤酵母pPIC9K表达系统已被广泛使用[1],但由于外源基因可通过单插入整合入基因组,产生多拷贝突变基因,从而干扰后续重组子的筛选;另一方面,pPIC9K表达系统需要...
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【中文期刊】 王睿 喻晓蔚 等 《生物工程学报》 2011年27卷9期 1326-1336页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 针对定向进化中利用亚克隆的方法建立酵母突变文库建库周期长、效率低、库容量低、丰度低等问题,建立了一种基于体内同源重组构建酵母整合型基因突变文库的新方法.步骤为:构建目标基因的重组表达质粒；以此为模版,设计长引物片段,PCR/易错PCR/DN...
【关键词】 酵母突变文库；PCR依赖性方法(PDM)；长引物；
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【中文期刊】 李楠楠 袁文杰 等 《生物工程学报》 2011年27卷7期 1032-1039页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 以乙醇耐受力较强的酿酒酵母为受体菌,构建了能够分泌菊粉酶的基因工程菌并进行了菊芋粉的生料发酵.首先,以马克斯克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus中的基因组DNA为模板,PCR扩增菊粉酶编码基因inu,分别使用菊粉酶自身启...
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【中文期刊】 辛清婷 马金芳 等 《中国生物化学与分子生物学报》 2010年26卷7期 622-629页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 DNA结合功能域的确定是阐明位点特异性重组酶整合机制的关键,而对酶DNA结合功能域进行突变研究是提高酶整合效率和整合特异性的重要方法.为了鉴定ΦC31位点特异性整合酶的DNA结合功能域,依据对ΦC31整合酶序列的生物信息学分析结果,利用PC...
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【中文期刊】 袁伟 柯涛 等 《生物工程学报》 2010年26卷9期 1281-1286页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 凝乳酶在奶酪加工中应用广泛,为获得高活性的凝乳酶制剂,采用乳酸克鲁维酵母为宿主,首次对经密码子优化的牛凝乳酶原基因进行表达.利用DNAWorks3.0 软件辅助设计,用两步PCR 法合成了小牛凝乳酶原基因(GenBank Accession...
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【中文期刊】 赵妍 余涛 等 《中国生物化学与分子生物学报》 2010年26卷2期 95-103页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 位点特异重组系统由重组酶和相应的重组酶识别位点组成,通过两者间的相互作用,实现外源基因精确整合与切除等一系列遗传操作.主要可分为Cre/lox系统、FLP/frt系统、R/RS系统和Gin/gix系统.目前,研究最充分应用最广泛的位点特异重...
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【中文期刊】 赵艳 王慧中 等 《中国生物化学与分子生物学报》 2008年24卷9期 819-825页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 在基因枪介导转化的转基因水稻植株中发现1个四倍体变异株系XIP-4N.该变异株系T0代植株中转基因的整合模式与二倍体转基因株系XIP-2N相同,并且二者来自同一转化体系,推测XIP-4N株系是转化后的水稻愈伤组织在细胞有丝分裂过程中发生染色...
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