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【中文期刊】 陈其军 安瑞 等 《生物化学与生物物理进展》 2004年31卷10期 951-954页 SCIISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 与Gateway技术兼容的农杆菌双元载体系统已开始应用于植物功能基因组的研究,但应用这些载体系统的一个瓶颈问题,是如何简单、经济和高效地将PCR产物或其他来源的目的DNA片段构建到入门载体上获得入门克隆.为此,将传统的TA克隆技术与Gate...
【关键词】 Gateway克隆技术； TA克隆技术； 入门载体；
【中文期刊】 余旭平 朱军莉 等 《遗传学报》 2003年30卷8期 730-736页 SCIMEDLINEISTICCSCDCABP
【摘要】 自行设计一对引物,从质粒pUC18上扩增一段无启动子和信号肽的β-内酰胺酶基因(△P△SP Amp),以作为最终构建的载体克隆到带跨膜信号基因片段的报告基因.所设计的上游引物中依次带有分别处于3个不同阅读框架、且形成匹配粘性末端的3个酶切位...
【中文期刊】 俞露 李强 等 《中国实验血液学杂志》 2018年26卷3期 647-652页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:通过克隆环状RNA hsa_circ 0000254,构建过表达载体并初步鉴定其表达水平,为进一步的功能研究奠定基础.方法:人工合成hsa_circ_0000254的524 bp序列,用pGH克隆载体合成基因,然后酶切目的片段,连接到...
【关键词】 急性髓系白血病； 环状RNA； hsa_circ_0000254；
【中文期刊】 刘晓艳 方红 等 《浙江大学学报（医学版）》 2013年42卷1期 67-74页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:模拟miR30的框架结构设计针对HPSE的shRNA,将其克隆至慢病毒载体的CMV启动子调控的表达框内,实现Ⅱ型启动子对RNAi的有效调控.方法:设计3条基于miR30骨架的HPSE-shRNA,通过PCR获得目的片段,回收后与线性化...
【中文期刊】 王美玲 吴茜茜 等 《生物学杂志》 2013年30卷4期 71-74页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 基因组文库是分子克隆和基因组学的技术基础,它主要经历了噬菌体系列文库、人工染色体系列文库和多元载体系列文库三个阶段.介绍了λ噬菌体文库、cosmid文库、P1噬菌体及PAC文库、fosmid文库、YAC文库、BAC文库、MAC文库、HAC文...
【中文期刊】 汤谷平 范辉 等 《浙江大学学报（医学版）》 2012年41卷6期 593-598页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 随着对生物材料学、基因组学及药物学等研究的深入,阳离子聚合物材料在基因传递、药物释放的研究中发挥着越来越重要的作用,受到研究者广泛的关注和重视.文中就阳离子聚合物作为基因载体的特点、研究进展和趋势等作一概述.
【中文期刊】 马怡晖 于双妮 等 《中华病理学杂志》 2012年41卷7期 470-474页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建miR-23a-27a簇真核表达载体并初步探讨该簇的靶基因及其功能.方法 应用分子克隆的方法构建联合表达pre-miR-23 a-27a簇及单独表达pre-miR-23a、pre-miR-27a的真核载体,应用双荧光素酶报告基因试...
【中文期刊】 张丽 袁红花 等 《实用医学杂志》 2012年28卷3期 370-373页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的:克隆Nestin基因启动子序列,并研究其调控能力.方法:用高保真酶PCR扩增出小鼠Nestin启动子全序列、核心序列,pcDNA3.1质粒双酶切切掉CMV启动子序列,将Nestin基因启动子序列插入到原CMV启动子位置,pEGFP-N...
【中文期刊】 朱靖 周颖 等 《安徽医科大学学报》 2011年46卷5期 493-496页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的 构建GRIM-19原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化GST-GRIM-19融合蛋白.方法 用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的GRIM-19基因片段,将其克隆至pGEX-4T-3原核表达载体上,...
【中文期刊】 王青元 朱靖 等 《安徽医科大学学报》 2011年46卷2期 112-115页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的 构建pET-22b-3×flag-HPV18E6原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白.方法 用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出带HindⅢ、SalⅠ酶切位点的HPV18E6基因片段,将HPV18E6基因片段克隆到p3×fl...
【中文期刊】 邵喜英 陈占红 等 《浙江大学学报（医学版）》 2011年40卷2期 189-194页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP与pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP真核表达质粒,并观...
【关键词】 细胞色素P450酶系统/遗传学； 质粒； 遗传载体；
【中文期刊】 王强 彭开松 等 《生物学杂志》 2011年28卷2期 43-46页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 利用RT-PCR技术,从鸡肺脏总RNA中克隆了Gal-2 eDNA全序列,以克隆载体为模板PCR扩增Gal-2成熟肽eDNA,将成熟肽eDNA插入到分泌型表达载体pPIC9k中,构建pPIC9k-Gal-2成熟肽表达载体;通过电转化方法将表...
【中文期刊】 张薇 沈权 等 《浙江大学学报（医学版）》 2011年40卷4期 427-431页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:建立可用于前体mRNA可变剪接分析的NCAM L1小基因模型.方法:以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得NCAM L1小基因片段,并将其克隆至真核表达载体中,构建小基因的质粒.在此基础上,用NCAM L1小基因模型转染HeLa、...
【中文期刊】 赵虹 张惊宇 等 《浙江大学学报(医学版)》 2010年39卷6期 623-627页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建人STUB1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定.方法:针对筛选确定的人STUB1 基因RNAi有效靶点序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Age I 和E...
【中文期刊】 彭丽婵 丁彪 等 《生物学杂志》 2010年27卷3期 5-7页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 实验通过对兔子基因组DNA进行PCR获得兔IFRG基因,将其克隆到pGEM-T载体,双酶切鉴定和测序结果表明成功构建了重组克隆载体pGEM-T-IFRG.通过RT-PCR分析发现IFRG基因在兔不同组织中有不同程度的表达.将重组克隆载体pG...
【中文期刊】 李纪鹏 付汉江 等 《安徽医科大学学报》 2010年45卷3期 294-297页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的 构建人工miRNA表达簇,并研究miRNA的加工对蛋白质表达水平的影响.方法 从miRNA表达库中扩增miR-34a及miR-424的前体序列,将上述两种miRNA串联,构建PGL-34a-424人工miRNA簇表达载体.通过RT-P...
【中文期刊】 和艳敏 陶苏丹 等 《中国实验血液学杂志》 2010年18卷5期 1256-1259页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 本研究构建mica基因原核表达系统并纯化MICA蛋白.利用外周血标本提取RNA,经RT-PCR获取mica基因cDNA.将mica cDNA经TOPO克隆连接构建克隆载体,然后将克隆重组载体和原核表达栽体pET-28a经双酶切后进行连接构建...
【中文期刊】 赵群力 闵娟 等 《山东大学学报（医学版）》 2010年48卷9期 29-33,39页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的 构建重组真核表达载体pVAX1-SPreS2作为基因佐剂,用以增强或调节弓形虫DNA疫苗的体液及细胞免疫效果.方法 采用重叠延伸PCR技术,扩增乙肝病毒表面抗原S和PreS2基因,引入编码GSGSGS柔性多肽序列作为接头拼接S和Pre...
【中文期刊】 赵群力 闵娟 等 《山东大学学报（医学版）》 2010年48卷9期 29-33,39页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的 构建重组真核表达载体pVAX1-SPreS2作为基因佐剂,用以增强或调节弓形虫DNA疫苗的体液及细胞免疫效果.方法 采用重叠延伸PCR技术,扩增乙肝病毒表面抗原S和PreS2基因,引入编码GSGSGS柔性多肽序列作为接头拼接S和Pre...
【中文期刊】 崔笑 尹宗生 《安徽医科大学学报》 2010年45卷1期 17-20页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的 构建人PP1α基因真核表达载体, 并观察其在人骨肉瘤细胞株(U-2OS)中的表达,为进一步研究PP1对骨肉瘤细胞凋亡影响提供基础.方法 提取U-2OS细胞中总RNA,RT-PCR扩增PP1α并克隆至pEGFP-N1载体,鉴定出阳性克隆...
【中文期刊】 黄先红 李长燕 等 《安徽医科大学学报》 2010年45卷5期 605-609页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的 构建人死亡相关蛋白11(THAP11)基因的慢病毒载体,并建立其慢病毒表达系统.方法 PCR方法获得人THAP11基因,限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒pBPLV-THAP11-myc,并通过转染HEK293细胞观察绿色荧...
【中文期刊】 赵春临 王家祥 等 《中华医学杂志》 2010年90卷34期 2428-2432页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建表达PTEN基因、同时又沉默Livin基因的复合载体,探讨调控PTEN和Livin基因对胃癌细胞的影响.方法 根据GenBank中人DNA的PTEN基因(NM_000314)和Livin(NM_139317)基因的全长序列设计,分...
【中文期刊】 寇洪超 王翠花 等 《基因组学与应用生物学》 2010年29卷5期 982-986页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 利用农杆菌侵染法获得抗软腐病转BrWRKY33基因大白菜,首先要构建植物表达载体.本实验根据BrWRKY33基因的序列及pROK2表达载体的酶切位点设计引物(FN/RN),获得BrWRKY33基因,然后将该基因连接到克隆载体pGEM-T E...
【中文期刊】 王刚 陈岳 等 《中华泌尿外科杂志》 2010年31卷5期 338-342页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建前列腺特异性双基因表达载体pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43,为前列腺癌基因治疗实验研究奠定基础. 方法获取Cx43基因并克隆至pMD19-T Simple载体;合成HSV-TK基因并克隆到pIRES载体的MCS A中,得...
【关键词】 前列腺肿瘤； 遗传载体； HSV-TK/GCV；
【中文期刊】 马超 朱宇鹏 等 《中国抗生素杂志》 2010年35卷11期 835-839页 ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 目的 构建链霉菌小型基因文库是获得链霉菌基因的一个重要手段,常规使用的克隆载体常有着一定程度的假阳性,因此构建的高效率的克隆载体有着实际的意义.方法 本研究通过重叠延伸PCR手段将一个96bp的多克隆位点序列插入至rpsL基因的启动子和开放...
【中文期刊】 高维陆 尹宗生 等 《安徽医科大学学报》 2009年44卷4期 430-433页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的 克隆大鼠海马中Neurogenesin-1(Ng1)基因片段,构建pSecTag2/Hygro B-Ng1真核表达载体,并检测其在cos-7细胞中的表达,为进一步研究该基因对脊髓神经干细胞分化的影响提供实验依据.方法 在无RNA酶污染...
【中文期刊】 贾荣荣 强毅 等 《西北植物学报》 2009年29卷9期 1756-1763页 ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 在克隆了拟南芥蔗糖磷酸合成酶AtSPS5.1的基础上,选择其中特异性的188 bp片段,以正反两个方向插入克隆载体pKANNIBAL中,再将该克隆载体连接入具有NPTⅡ筛选标记的表达载体pART-27中,构建成RNAi-SPS5.1干涉载体...
【中文期刊】 宫婷 李鸿立 等 《浙江大学学报(医学版)》 2009年38卷2期 125-129页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建趋化因子CCL21的真核表达载体并表达蛋白,初步检测其趋化活性.方法:RT-PCR方法扩增CCL21 cDNA片段,并将扩增的片段插入pcDNA3.1真核表达载体,构建重组载体pcDNA3.1-mCCL21,将其转染到小鼠前胃癌细...
【中文期刊】 钱韵 姚航平 等 《浙江大学学报(医学版)》 2009年38卷2期 117-124页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建小鼠B7-H4胞外区基因的真核表达载体,转染酵母细胞以表达mB7-H4,并检测其生物学活性.方法:以mB7-H4的重组质粒为模板,在克隆引物上加入Xho I和EcoR I酶切位点,并用PCR方法扩增得到mB7-H4胞外区的基因片段...
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