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【中文期刊】 凤梓涵 王静 等 《微生物学通报》 2021年48卷8期 2632-2642页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 [背景]基于自杀载体的基因敲除在单基因敲除上的应用较为常见,但在多基因敲除过程中细菌耐药性的变化及对后续敲除的影响尚未明确.[目的]探究基于自杀载体pDS132的创伤弧菌vvhA与rtxA1双基因敲除株构建过程中,创伤弧菌对氯霉素耐药性的变...
- 概要：
- 方法：
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【中文期刊】 邓木兰 梁志成 等 《微生物学通报》 2020年47卷2期 649-658页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 [背景]表达载体是基因工程必不可少的工具,对于真菌如里氏木霉(Trichoderma reesei)等,由于缺乏商品化的表达载体,使其基因工程蛋白表达既复杂又费时而难以开展.[目的]建立一种利用URA3序列快速构建表达载体的方法,解决真菌研...
- 概要：
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【中文期刊】 刘丽 徐华敏 等 《神经科学通报（英文版）》 2010年26卷3期 225-231页SCIMEDLINEISTICCSCDBP
【摘要】 目的 构建携带GHS-R1a基因的重组腺病毒,为转基因做准备.方法 采用PCR法扩增GHS-R1a基因片段,随后亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,形成重组质粒pAdTrack-CMV-GHS-R1a.线性化的pAdTrackC...
【关键词】 腺病毒载体；同源重组；生长激素促分泌素受体1a亚型；
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【中文期刊】 毛灵琪 李存治 等 《生物技术通报》 2016年32卷4期 203-209页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 旨在建立一种适合环己胺降解菌NyZ12基因无痕敲除的可靠方法。通过overlapping PCR技术将目的基因上下游同源臂融合并克隆到自杀载体pEX18km上，将重组质粒转化到大肠杆菌S17 pir中，再通过接合转移到假单胞菌NyZ12菌株...
- 概要：
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【中文期刊】 马凯 胡红霞 等 《中国病原生物学杂志》 2015年10卷6期 495-499页ISTICPKUCSCD
【摘要】 目的 以pMIR reporter为载体骨架,通过双酶切方法和同源重组方法构建载体,比较两种不同载体构建方法的优缺点.方法 双酶切方法使用HindⅢ和MluⅠ两种限制性内切酶分别酶切pMIR-reporter和经T A克隆后靶基因PCR片段...
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【中文期刊】 张旻 姜绍通 等 《生物工程学报》 2015年31卷8期 1203-1218页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为了建立适合米根霉的遗传转化体系,应用重叠延伸PCR的方法构建了以潮霉素B抗性为选择标记的单交换整合型表达载体pBS-hygro-ldhA;分别采用PEG/CaCl2介导的原生质体转化、原生质体电转化及萌发孢子电转化的方法将表达载体pBS-...
- 概要：
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【中文期刊】 李一权 阚式绂 等 《中国病原生物学杂志》 2014年9卷11期 961-964,974页ISTICPKUCSCD
【摘要】 目的 通过敲除天坛株痘苗病毒(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)的复制非必需基因TC7L-TK2L,并结合双标记筛选及外源筛选标记敲除技术构建TC7L-TK2L基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TC7L--T...
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【中文期刊】 左颀 赵心清 等 《生物工程学报》 2014年30卷4期 669-673页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 染色体整合表达可获得稳定遗传的基因工程菌,是工业酿酒酵母育种的重要手段.pAUR135整合载体是抗生素标记基因可循环使用的载体,添加特定的同源臂后可构建在酵母染色体上稳定遗传的菌株.目前对酵母菌的分子育种常需要对多个基因进行过表达,利用pA...
【关键词】 同源重组；pAUR135整合载体；工业酿酒酵母；
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【中文期刊】 李玲 国蓉 等 《第二军医大学学报》 2014年35卷2期 185-190页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体,最终获得胰岛β细胞中特异性表达Cre重组酶的基因敲入小鼠,为胰岛β细胞功能研究提供良好的基因敲除动物模型.方法 以低拷贝质粒pBR322-2s为骨架构建取获载体(retrievi...
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【中文期刊】 李军华 韩翠芹 等 《生物工程学报》 2010年26卷12期 1696-1703页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 利用DNA同源重组方法(基因打靶)对动物基因组进行修饰是转基因研究的重要手段之一.为了构建一个高效的通用型基因打靶载体,本研究以pBS246质粒为骨架,在两个LoxP序列之间插入正筛选标记新霉素磷酸转移酶(neo)基因和绿色荧光蛋白(EGF...
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【中文期刊】 龚明福 滕亮 等 《第三军医大学学报》 2009年31卷22期 2240-2242页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建适用于革兰阴性菌的快速基因失活载体系统并进行初步应用.方法 应用分子克隆技术构建快速基因失活载体系统.载体成分主要包括:π蛋白依赖件复制起点ori R6K;编码接合转移的mob片段;多克隆位点序列;含有2个Xcm Ⅰ酶切位点的T载...
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【中文期刊】 张林 童卫东 等 《中华消化外科杂志》 2007年6卷2期 132-135页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建含有人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因的重组腺病毒载体,并观察其对Cajal间质细胞的转染及其介导的SCL基因的表达.为下一步在体转染Cajal间质细胞,观察其对Cajal间质细胞表型逆转的影响奠定...
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【中文期刊】 张林 刘宝华 等 《中华胃肠外科杂志》 2007年10卷2期 119-123页MEDLINEISTICPKUCSCD
【摘要】 目的 研究绿色荧光蛋白(GFP)标记的人干细胞白血病基因(SCL)重组腺病毒载体的快速构建及在Cajal间质细胞(ICC)缺失模型鼠体内的分布和表达,为进一步研究慢传输型便秘(STC)的基因治疗奠定基础.方法 利用Ad-Easy系统、细菌内...
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【中文期刊】 陈竞 高砚春 等 《现代生物医学进展》 2016年16卷17期 3253-3255,3275页ISTICCA
【摘要】 目的:研究细菌内同源重组法构建靶向Survivin的腺病毒载体及其体外扩增表达.方法:将survivin基因克隆至穿梭质粒载体中,特异性酶切后回收、连接、转化,构建负载survivin片段的重组腺病毒载体.提取重组病毒基因酶切鉴定后,包装成...
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【中文期刊】 屈振亮 王西墨 《中华实验外科杂志》 2014年31卷8期 1718-1720页ISTICCA
【摘要】 目的 应用腺病毒AdEasy系统构建含1.3拷贝乙型肝炎病毒(HBV)基因组的腺病毒载体,并鉴定目的蛋白的表达.方法 采用基因重组技术将4.1 kb的1.3拷贝HBV基因序列克隆在腺病毒穿梭质粒上,通过在大肠杆菌内与骨架质粒的同源重组,构建...
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- 概要：
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【中文期刊】 宋衍秋 赵莉莉 等 《现代生物医学进展》 2009年9卷5期 863-867页ISTICCA
【摘要】 目的:构建携带人BNP cDNA片段高效重组腺病毒Ad-hBNP,为实验提供研究工具.方法:从人心肌组织提取的RNA,用RT-PCR方法中获得hBNP扩增片段,与pUCm-T载体连接构成pUC-hBNP重组质粒;用KpnI、SalI分别双酶...
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【中文期刊】 熊亮发 冷希圣 等 《中华实验外科杂志》 2004年21卷3期 316-318页ISTICCA
【摘要】 目的构建载有白细胞介素-10(IL-10)基因的,能在肝星状细胞(HSC)稳定表达的重组腺病毒载体,为将来的肝纤维化基因治疗提供基础.方法将IL-10cDNA克隆于腺病毒穿梭质粒PAdTrack-CMV,得到重组质粒PadTrack-CMV...
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【会议论文】姜爽 第九届全国免疫学学术大会 2014年
【摘要】 研究背景:痘苗病毒(Vaccinia virus,VV)属于痘病毒科(Poxviridae)正痘病毒属(Orthopoxvirus),具有宿主范围广泛、外源基因容量大、胞质复制等优势,具备成为高效安全基因工程载体的潜质.痘苗病毒目前已广泛应...
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【会议论文】李一权 第九届全国免疫学学术大会 2014年
【摘要】 研究背景:痘苗病毒已广泛应用于研究基因工程疫苗载体及外源基因表达系统等领域.目前研究痘苗病毒表达载体取得了长足的发展,但其安全性仍待提高.提高病毒安全性有多种方法,包括应用基因工程技术敲掉毒力相关基因和缩短病毒宿主范围等方法.因此,进一步降...
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【学位论文】 作者：张伟锋 导师：夏海滨 陕西师范大学 生物学 生物化学与分子生物学（博士） 2014年
【摘要】 单基因遗传性疾病是由于单基因缺陷所造成的可遗传的疾病,长期以来一直困扰着人类,采用传统的疗法很难根治这类疾病.基因治疗为该类疾病的治疗提供了新的途径.目前基因治疗多是通过病毒载体如逆转录病毒载体(Retrovirus)、慢病毒载体(Lent...
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【学位论文】 作者：李玲 导师：章卫平 第二军医大学 基础医学 病理学与病理生理学（硕士） 2013年
【摘要】 β细胞是体内胰岛素的主要来源,在维持血糖平衡中起着关键作用.β细胞不仅仅是分泌胰岛素的加工厂,而且还精细调节胰岛素的分泌,使血糖在较窄的范围内保持稳定.近年来,随着人们生活水平提高及生活方式的改变,2型糖尿病的发病率呈现逐年增加的趋势,进行...
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【学位论文】 作者：沈涛 导师：李青旺 西北农林科技大学 生物学 动物学（硕士） 2011年
【摘要】 叉头框L2（Forkhead Box L2,FOXL2）基因是在动物眼睑以及卵巢颗粒细胞中有表达的基因。该基因所编码的蛋白在动物胚胎发育以及卵巢的形态及功能的维持中起着重要的作用。FOXL2基因发生突变,则会导致动物患有小睑裂综合症（BPE...
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【学位论文】 作者：许昌 导师：胡明道 昆明医学院 临床医学 外科学（硕士） 2011年
【摘要】 [目的]利用AdEasy腺病毒载体系统,应用细菌内同源重组法构建并鉴定恒河猴CD40L胞外段基因(efCD40L)重组腺病毒载体.[方法]overlap PCR法合成恒河猴CD40L胞外段基因,琼脂糖凝胶电泳、测序鉴定正确后与高效克隆载体p...
【关键词】 恒河猴 ； CD40L胞外段基因 ；
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【学位论文】 作者：韩翠芹 导师：王华岩 西北农林科技大学 生物学 细胞生物学（硕士） 2011年
【摘要】 采用同源重组原理进行基因敲除,需要构建有效的打靶载体,但是目前常用的基因打靶载体在一次打靶中只敲除目标基因的一个等位靶基因,如要敲除一对等位基因,其操作和筛选都较困难.为解决这一技术难点,本研究构建了一个通用型等位基因双敲除打靶系统,并且对...
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【学位论文】 作者：凌静 导师：刘嘉茵 南京医科大学 临床医学 妇产科学（硕士） 2009年
【摘要】 目的:热休克蛋白10(heat shock protein 10,HSP10)又称CPN10、GROES或HSPE1,属于小分子热休克蛋白家族成员,主要作为一种分子伴侣蛋白,与HSP60协同,在蛋白质折叠中发挥作用;HSP10还参与细胞周期...
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【中文期刊】 王刚 肖雨 等 《中国生物工程杂志》 2019年39卷8期 66-73页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 以保加利亚乳杆菌Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus CICC21101为出发菌株,利用PCR扩增L-乳酸脱氢酶(ldhL)基因上下游序列ldhL1、ldhL2,获得ldhL基因缺失且包含上下...
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【中文期刊】 朱燕 韩小韦 等 《生物工程学报》 2019年35卷5期 827-836页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 核酸外切酶Ⅷ(ExonucleaseⅧ,ExoⅧ)是一种不依赖于ATP的dsDNA 5’-3'核酸外切酶,可作为体外DNA重组反应极具应用价值的候选蛋白.目前关于ExoⅧ在体外DNA重组反应中的应用尚未有文献报道.本研究构建了保留完整外切活...
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【中文期刊】 陈咏 田新贵 等 《中华微生物学和免疫学杂志》 2019年39卷9期 645-651页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 目的 采用一种快速高效的体外重组法制备表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组人14型腺病毒载体rAd14-EGFP.方法 BJ5183菌内同源重组构建人腺病毒14型骨架质粒pBRAd14,线性化后转染AD293细胞拯救病毒.利用Exnas...
- 概要：
- 方法：
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【中文期刊】 张文婷 唐娟 等 《中国当代儿科杂志》 2019年21卷7期 708-712页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建携带鼠IL-10(rIL-10)基因重组腺病毒载体,并探讨其能否在鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中稳定表达.方法 rIL-10引物经PCR扩增rIL-10 cDNA序列,将回收到的656 bp rIL-10 DNA片段克隆入pcD...
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