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            【中文期刊】 黄艳燕  左文朴  等 《工业微生物》 2009年39卷5期 18-24页ISTICCA

            【摘要】 将绿色木霉葡聚糖内切酶EGIII基因亚克隆到表达载体pET-22b(+),构建重组质粒pET-egl3,转化到大肠杆菌BL21(DE3).利用金属亲和层析对重组EGIII进行纯化,纯化后酶比活力达到6 U/mg蛋白,最适反应温度为60 ℃,...

            【关键词】 绿色木霉葡聚糖内切酶III大肠杆菌

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            【中文期刊】 林丽华  秦国梅  等 《生物工程学报》 2009年25卷6期 927-931页MEDLINEISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 对内切葡聚糖酶的功能改进一直是纤维素酶研究领域的焦点.本研究对台湾家白蚁内切葡聚糖酶(CfEG)的活性位点做了饱和突变.首先,以PDB数据库中高山象白蚁内切葡聚糖酶(NtEG)的三维结构(PDB id=1ks8)为模板,对CfEG进行三维结...

            【关键词】 台湾家白蚁内切葡聚糖酶定点饱和突变

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            【中文期刊】 李亚平  种慧敏  等 《西安交通大学学报(医学版)》 2019年40卷3期 459-464页ISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 目的 比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase,PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案.方法 以大肠杆菌碱性磷酸酶(...

            【关键词】 芳香硫酸酯酶定点饱和突变随机引物

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            【中文期刊】 佘文文  倪静  等 《湖北大学学报(自然科学版)》 2019年41卷1期 1-4,9页

            【摘要】 定点饱和诱变技术一直以来被广泛应用于蛋白的定向进化和代谢途径的研究,然而建立偏爱性低的高质量饱和突变库一直面临着严峻挑战.提出一种改进的建立智能突变体文库的方法,选取柠檬烯环氧水解酶(LEH)为突变对象,摒弃传统的NNK/NNN密码子简并引...

            【关键词】 定点突变饱和突变PCR

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            【中文期刊】 吴芹  臧嘉  等 《食品与生物技术学报》 2019年38卷7期 65-70页

            【摘要】 为改善米曲霉木聚糖酶AoXyn11A的温度特性,基于其三维结构的同源建模和分子动力学模拟,随机替换最高B-factor值位点处的Gly21.以重组表达质粒pET-28a-A oxyn11A为模板,采用全质粒两步PCR技术对AoXyn11A基...

            【关键词】 定点饱和突变木聚糖酶温度特性

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            【中文期刊】 史京辉  陈文慧  等 《生物技术通报》 2024年40卷1期 322-331页ISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 [目的]11α,17α-双羟基黄体酮是重要的甾体激素类药物中间体,应用价值大.赭曲霉(Aspergillus ochraceus)CICC 41473 的 11α羟化酶CYP68J5 是转化 17α-羟基黄体酮生成 11α,17α-双羟基黄...

            【关键词】 11α,17α-双羟基黄体酮11α羟化酶定点饱和突变

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            【中文期刊】 徐依聪  李家璜  等 《药物生物技术》 2024年31卷3期 221-227页ISTICCA

            【摘要】 采用理性设计策略提高费氏弧菌转录因子LuxR蛋白的转录激活能力.利用蛋白质建模和分子对接方法构建了 LuxR同源二聚体-3-oxo-C6-HSL复合物,进一步采用分子动力学模拟并进行结合自由能分析,寻找影响LuxR活性的潜在突变位点,最终借...

            【关键词】 LuxR蛋白理性设计分子动力学模拟

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            【中文期刊】 董新林  胡青  等 《生物技术》 2024年34卷2期 158-164页ISTICCA

            【摘要】 [目的]建立一种快速、高通量筛选3-甾酮-Δ1-脱氢酶(KstD)突变体库的方法.[方法]基于已发表KstD蛋白晶体结构,设计饱和突变引物,构建突变体文库,优化蛋白表达条件,利用冻融法结合溶菌酶法获得粗酶液;基于分光光度法原理,优化检测反应...

            【关键词】 3-甾酮-Δ1-脱氢酶定点饱和突变高通量筛选

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            【中文期刊】 柴宝成  姜钰琳  等 《生物工程学报》 2022年38卷2期 749-759页MEDLINEISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 染料木素及其单糖苷衍物在食品和医药领域具有重要作用,但难溶于水的特性极大地限制了其应用范围,研究表明糖基化反应可有效提高其水溶性.文中针对来源于软化芽孢杆菌的环糊精葡萄糖基转移酶,研究其对染料木素单糖苷衍生物槐角苷的糖基化反应.通过对D18...

            【关键词】 染料木素槐角苷环糊精葡萄糖基转移酶

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            【中文期刊】 王越  李江华  等 《中国生物工程杂志》 2019年39卷3期 56-64页ISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG)是谷氨酸脱氨基的酮酸产物,作为一种重要的有机酸广泛用于食品、医药、精细化工等领域.为提高L-氨基酸脱氨酶全细胞催化法合成α-KG的效率及产量,首先通过优化全细胞催化剂制备条件及...

            【关键词】 L-氨基酸脱氨酶条件优化定点饱和突变

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            【中文期刊】 李雪晴  刘艳  等 《微生物学通报》 2018年45卷7期 1401-1407页ISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 [背景]光学纯L-苯乳酸是一种天然防腐剂,也是一种高附加值的手性分子,在食品、制药和材料等领域有广阔的应用前景.本实验室已发现来源于Lactobacillus casei CICIM B1192的NADH依赖型L-乳酸脱氢酶(L-LcLDH...

            【关键词】 Lactobacillus caseiL-乳酸脱氢酶定点饱和突变

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            【中文期刊】 普鸿丽  吕波  等 《生物工程学报》 2015年31卷7期 1119-1128页MEDLINEISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 为了提高Escherichia coli重组表达的β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E)的键选择性,本研究以PGUS-E结构与功能关系的推测为指导,选择了可能影响PGUS-E的键选择性的R329、T369、N467位点进行定点饱和突变,利用薄层...

            【关键词】 β-葡萄糖醛酸苷酶单葡萄糖醛酸基甘草次酸键专一性

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            【中文期刊】 许乔艳  韩瑞枝  等 《生物工程学报》 2014年30卷1期 98-108页MEDLINEISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 通过改造来源于软化类芽胞杆菌Paenibacillus macerans的环糊精糖基转移酶(Cyclodextrin glycosyltransferase,CGT酶)的+1亚位点提高其对麦芽糊精的底物特异性,并进一步提高以麦芽糊精为糖基供...

            【关键词】 环糊精糖基转移酶L-抗坏血酸麦芽糊精

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            【中文期刊】 王辂  叶丽娟  等 《微生物学通报》 2012年39卷10期 1447-1456页ISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 [目的]克隆红纹黄单胞菌α-氨基酸酯水解酶基因全序列,对序列进行生物信息学分析,并提高酶的热稳定性.[方法]利用多聚酶链式反应(PCR)克隆α-氨基酸酯水解酶基因全序列;应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析;通过同源建...

            【关键词】 α-氨基酸酯水解酶红纹黄单胞菌序列分析

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            【中文期刊】 欧晨辉  沈辰  等 《药物生物技术》 2019年26卷4期 296-300页ISTICCA

            【摘要】 细胞色素CYP105D1是Streptomyces griseus ATCC 13273中生物转化左旋四氢巴马汀合成左旋紫堇达明的关键酶,课题组前期成功在原核体系中克隆了CYP105D1,实现了利用工程菌株生物转化合成制备左旋紫堇达明.但是...

            【关键词】 CYP105D1左旋四氢巴马汀左旋紫堇达明

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            【中文期刊】 张瑞  吴萼  等 《生命的化学》 2018年38卷1期 135-143页ISTIC

            【摘要】 萜类化合物是自然界中普遍存在的一大类天然产物,其结构多样.倍半萜化合物是萜类化合物的重要组成部分.倍半萜合酶是倍半萜化合物合成过程中的关键酶.本文综述了近年来多种倍半萜合酶的突变研究,阐明了倍半萜合酶的催化机理.

            【关键词】 倍半萜化合物倍半萜合酶定点饱和突变

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            【中文期刊】 焦凌霞  徐茜茜  等 《现代食品科技》 2016年32卷3期 12-17页

            【摘要】 转基因食品中苏云金芽胞杆菌(Bt) Cry毒素种类较多,对生态环境和食品安全等造成的潜在风险日益受到关注,制备针对多种Cry毒素的高效广谱抗体,进而建立广谱性快速检测方法,是对转Bt基因作物进行监管并确保生态环境和食品安全的基础.本研究利用...

            【关键词】 Cry1毒素单链抗体同源建模

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            【中文期刊】 江泽沅  柳羽哲  等 《食品科学》 2023年44卷18期 110-116页

            【摘要】 通过定点突变技术,提高高丝氨酸脱氢酶(homoserine dehydrogenase,HSD)的催化活性,减少通路中代谢产物对其产生的反馈抑制和阻遏作用.对HSD与底物高丝氨酸分子进行对接,通过其空间结构分析,选择Asp61和Gly25两...

            【关键词】 谷氨酸棒状杆菌高丝氨酸脱氢酶酶学性质

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            【中文期刊】 刘嘉琦  谭明  等 《生物工程学报》 2024年40卷6期 1845-1855页MEDLINEISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 α-熊果苷在化妆品和医药领域具有重要应用价值,但从植物组织中提取产率低,极大地限制了其应用.本研究利用戈特沙尔克厌氧分支杆菌(Anaerobranca gottschalkii)来源的环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin gluc...

            【关键词】 环糊精葡萄糖基转移酶α-熊果苷定点突变

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            【中文期刊】 马亚迪  尤翠萍  等 《生物工程学报》 2023年39卷8期 3481-3493页MEDLINEISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 甘油二酯(diacylglycerol,DAG)是油脂代谢的中间产物,在人体中具有重要的生理功能,主要通过脂肪酶水解油脂制备.但对 1,2-甘油二酯(1,2-diacylglycerol,1,2-DAG)、1,3-甘油二酯(1,3-diac...

            【关键词】 脂肪酶甘油二酯半理性设计

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            【中文期刊】 王剑峰  李文英  等 《生物工程学报》 2022年38卷12期 4615-4629页MEDLINEISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 转酮醇酶(transketolase,TK,EC.2.2.1.1)是一种焦磷酸硫胺素和二价阳离子依赖性酶,可催化二碳单位的转移,可逆形成C-C键,在多酶催化生产化学品、药物前体和不对称合成方面有广泛应用.文中以大肠杆菌(Escherichi...

            【关键词】 转酮醇酶定点突变酶学性质

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            【学位论文】 作者:朱运明 导师:闵伟红   吉林农业大学   化学工程与技术 发酵工程(硕士) 2015年

            【摘要】 天冬氨酸激酶(Aspartate kinase,AK)是一种控制生物合成工业中重要天冬氨酸族氨基酸的关键酶,受支路代谢终产物调控.本研究通过改善AK活力,达到解除其在天冬氨酸族氨基酸代谢途径中受代谢产物的反馈抑制,以实现工业中天冬氨酸族氨基...

            【关键词】 北京棒杆菌天冬氨酸激酶

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            【学位论文】 作者:郭永玲 导师:闵伟红   吉林农业大学   化学工程与技术 发酵工程(硕士) 2014年

            【摘要】 天冬氨酸激酶(Aspartokinase,AK)催化底物L-天冬氨酸和ATP生成天冬氨酰-β-磷酸和ADP,是天冬氨酸族氨基酸生物合成途径中首个关键酶,但其活性受分支途径代谢产物的反馈抑制.本研究在实验室成功克隆北京棒杆菌(Coryneba...

            【关键词】 北京棒杆菌天冬氨酸激酶

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            【学位论文】 作者:韩瑞枝 导师:堵国成   江南大学   化学工程与技术 发酵工程(博士) 2013年

            【摘要】 2-氧-D-吡喃型葡萄糖基-L-抗坏血酸(2-O-D-glucopyranosyl-L-ascorbic acid,AA-2G),是一种L-抗坏血酸(L-ascorbic acid,L-AA;俗称Vitamin C)的衍生物.它克服了L-A...

            【关键词】 2-氧-D-吡喃型葡萄糖基-L-抗坏血酸环糊精葡萄糖基转移酶

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            【学位论文】 作者:任军 导师:闵伟红   吉林农业大学   化学工程与技术 发酵工程(硕士) 2013年

            【摘要】 天冬氨酸激酶(Aspartokinase, AK)是天冬氨酸族氨基酸生物合成途径的限速酶,其受支路代谢产物的严格反馈抑制.为进一步提高AK催化活性,解除末端产物反馈抑制,以便构建高产氨基酸的工程菌株,本研究克隆了北京棒杆菌E31菌株的关键酶...

            【关键词】 天冬氨酸激酶克隆表达

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            【学位论文】 作者:董焱鹏 导师:冯露   南开大学   生物学 微生物学(博士) 2012年

            【摘要】 一嗜热脱氮土壤芽胞杆菌NG80-2长链烷烃羟化酶LadA的体外定向进化嗜热脱氮土壤芽胞杆菌(Geobacillus thermodenitrificans)NG80-2,分离于我国大港油田,是一株能降解长链(C15-C36)烷烃的嗜热菌(最...

            【关键词】 长链烷烃羟化酶LadA定向进化

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            【学位论文】 作者:宫绪敏 导师:喻晓蔚   江南大学   生物学 微生物学(硕士) 2012年

            【摘要】 本研究主要通过对近平滑假丝酵母中的立体选择性羰基还原酶SCR1酶同源模型的比较和分析,确立辅酶结合域的目标位点(P124,W125),通过定点突变的方式考察这些位点及其突变氨基酸对酶催化性能的影响.另外,通过NMR检测SCR1结合配体前后的...

            【关键词】 羰基还原酶定点突变

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            【学位论文】 作者:黄坚丽 导师:韦宇拓   广西大学   生物学 微生物学(硕士) 2012年

            【摘要】 α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase,EC3.2.1.20)是一类从含有α-糖苷键底物的非还原末端催化水解α-葡萄糖基酶的总称。该酶是工业上生产低聚异麦芽糖的关键酶制剂,低聚异麦芽糖是一种功能性低聚糖,具有良好的促进双歧杆菌生长、降低...

            【关键词】 绿色糖单孢菌α-葡萄糖苷酶

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            【学位论文】 作者:聂洪丽 导师:汤丽霞   电子科技大学   生物学 生物化学与分子生物学(硕士) 2011年

            【摘要】 卤醇脱卤酶不仅可以催化污染环境的有机卤化物的分解,从而降低其污染性,而且可以催化合成许多药物的中间体,在手性药物合成方面有广阔的应用前景,不过目前数据库中只有6种此类酶,为更好的利用这种酶,一方面可以运用突变等手段在催化活性、稳定性等方面改...

            【关键词】 卤醇脱卤酶定点突变

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            【学位论文】 作者:王青艳 导师:黄日波   广西大学   生物学 微生物学(硕士) 2006年

            【摘要】 具有较高酶活性和热稳定性的海藻糖合成酶在酶法生产海藻糖中很重要。我们用实验室进化方法获得了酶活力和热稳定性有所提高的突变酶。运用随机突变和定点饱和突变相联合的策略来产生突变库。经过一轮的随机突变,筛选到一个酶活力提高了80%且Km值下降(由...

            【关键词】 海藻糖合成酶随机突变

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