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            【中文期刊】 胡馨予  姚逸安  等 《中国细胞生物学学报》 2022年44卷6期 1087-1094页MEDLINEISTICCSCDCA

            【摘要】 绵羊成纤维细胞的分离培养是羊毛发育相关基因功能研究及分子育种研究的重要基础技术和手段,但是现有贴壁法和胰蛋白酶消化法分离培养所需时间长、效率低,双酶消化法与差速贴壁筛选法对绵羊皮肤成纤维细胞的分离培养效果尚不清楚.该实验目的在于通过优化绵羊...

            【关键词】 绵羊成纤维细胞皮肤组织

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            【中文期刊】 马小军  王加冕  等 《华北农学报》 2022年37卷2期 231-238页

            【摘要】 为研究绵羊大肠杆菌性乳腺炎中乳腺成纤维细胞的损伤情况及TLR4的作用机制,通过体外培养获得原代绵羊乳腺成纤维细胞,大肠杆菌人工感染细胞建立大肠杆菌性乳腺炎细胞模型,分析大肠杆菌对细胞损伤的影响及TLR4在大肠杆菌性乳腺炎中的作用.采用酶消化...

            【关键词】 绵羊大肠杆菌乳腺炎

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            【中文期刊】 吴飞  吴杰  等 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 2022年48卷1期 96-105页

            【摘要】 为了在绵羊肺成纤维细胞OAR-L1中高效表达外源蛋白,探索适合该细胞的转染方法,本研究比较了聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)、脂质体2000转染试剂(LipofectamineTM 2000 transfection...

            【关键词】 成纤维细胞OAR-L1转染方法慢病毒

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            【中文期刊】 胡广东  郝科兴  等 《遗传》 2018年40卷8期 647-656页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP

            【摘要】 piggyBac(PB)是一种能在多种动物细胞中进行转座的DNA转座子,作为一种转基因工具已被广泛应用于各种哺乳动物转基因研究中.针对不同物种对PB转座子进行改造,是提升其通用性的必要手段.为构建基于绵羊细胞进行转基因操作的通用型PB转座子...

            【关键词】 piggyBac转座子转座酶转基因

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            【中文期刊】 王伟  王玉霜  等 《遗传》 2016年38卷9期 831-840页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP

            【摘要】 在动物细胞中,抑制非同源末端连接(Non-homologous end joining, NHEJ)修复途径,可以提高同源重组(Homologous recombination, HR)修复基因组双链断裂(Double-strand bra...

            【关键词】 siRNALig4 基因同源重组

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            【中文期刊】 姚昱君  李广栋  等 《中国畜牧兽医》 2021年48卷12期 4497-4507页

            【摘要】 试验旨在利用白藜芦醇(Re)和褪黑素(MT)提高绵羊胎儿成纤维细胞电穿孔转染(电转)效率、优化卵母细胞体外成熟体系,以提高转基因动物生产效率.将绵羊胎儿成纤维细胞分为6组:对照组、添加白藜芦醇高、中、低(R-5、R-6、R-7)3种浓度组及...

            【关键词】 白藜芦醇褪黑素绵羊

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            【中文期刊】 蒙亚琦  姚旭东  等 《中国畜牧兽医》 2021年48卷10期 3533-3544页

            【摘要】 研究旨在利用单碱基编辑技术定点修饰绵羊(Ovis aries)成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)基因第1外显子以引入终止密码子,获得定点编辑类型的绵羊胚胎,为培育具有长毛性状的绵羊提供试验...

            【关键词】 绵羊成纤维细胞生长因子5(FGF5)单碱基编辑

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            【中文期刊】 郭延华  皮文辉  《新疆农业科学》 2021年58卷9期 1747-1755页

            【摘要】 [目的]在绵羊成纤维细胞中,针对ACTG1基因羧基端,定点导入荧光蛋白标记基因,将外源基因定点导入绵羊基因组中,建立有效的方法.[方法]CRISPR-Cas9系统在绵羊成纤维细胞基因组特定区域引起DNA双链断裂,从而诱导细胞修复断裂的的基因...

            【关键词】 绵羊成纤维细胞ACTG1

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            【中文期刊】 周川  赵云程  等 《生物学杂志》 2012年29卷5期 1-5页ISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 使用免疫荧光技术检测与增值、凋亡、多能性相关基因的表达水平.提高bFGF浓度可增强PCNA、Oct-4、Sox-2、Bax和Bcl-2的表达,同时使Bcl-2/Bax比值维持较稳定水平.结果表明提高bFGF浓度可增强oESC-like的增值...

            【关键词】 胚胎干细胞绵羊多能性

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            【中文期刊】 王彦凤  梁燕  等 《生物技术通报》 2010年12期 158-162页ISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 旨在构建胸腺素β4(thymosin beta 4,Tβ4)基因真核表达载体并转染绵羊胎儿成纤维细胞,获得稳定表达胸腺素β4及红色荧光蛋白的转基因细胞克隆.将克隆载体pMD19TT中的胸腺素β4基因亚克隆到表达载体pIRES2-DsRed2...

            【关键词】 胸腺素β4绵羊胎儿成纤维细胞转基因细胞系

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            【中文期刊】 王春生  张丽新  等 《四川动物》 2007年26卷4期 804-806,2页ISTICPKU

            【摘要】 为了探讨利用死亡珍稀动物皮肤建立成纤维细胞库的方法,本研究采集幼龄绵羊耳廓皮肤,在4℃条件下保存0 h(对照组)、24 h、48 h和72 h后进行原代培养,达到85%汇合后再进行了继代培养或者经冷冻-复苏后继代培养.结果:(1)与对照组相...

            【关键词】 绵羊皮肤4℃保存成纤维细胞

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            【中文期刊】 马玉珍  扈廷茂  等 《中国实验动物学报》 2003年11卷4期 195-198页ISTICPKUCSCDCA

            【摘要】 目的用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染体外培养绵羊胎儿成纤维细胞,探讨绿色荧光蛋白对绵羊胎儿成纤维细胞生物学特性的影响.方法体外分离培养绵羊胎儿成纤维细胞,经脂质体介导EGFP基因转染第一代成纤维细胞,G418筛选10~12*!d,挑...

            【关键词】 增强型绿色荧光蛋白绵羊,胎儿成纤维细胞

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            【中文期刊】 张世强  李孟心  等 《中国畜牧兽医》 2020年47卷3期 729-735页

            【摘要】 试验在体外分离培养1月龄绵羊胚胎成纤维细胞(sheep embryonic fibroblast,SEF),经丝裂霉素C处理后探讨其作为诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)体外培养饲养层...

            【关键词】 绵羊胚胎成纤维细胞(SEF)饲养层诱导性多能干细胞(iPSC)

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            【中文期刊】 刘腾  董丹丹  等 《中国动物传染病学报》 2018年26卷2期 54-58页

            【摘要】 为了利用携带人源端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的慢病毒表达系统将原代绵羊肺成纤维细胞进行永生化.本研究利用PCR技术从pBabe-neo-hTERT中扩增hTE...

            【关键词】 绵羊成纤维细胞人端粒酶逆转录酶永生化

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            【中文期刊】 李炜杰  杨娇  等 《新疆农业科学》 2015年52卷8期 1481-1485页

            【摘要】 [目的]采用实验室配制的电转液L,优化绵羊成纤维细胞的转染效率.[方法]利用Lonza 4D-Nucleofector设备,针对实验室配制的电转液L,将P max绿色荧光蛋白表达质粒导入绵羊成纤维细胞中,通过流式细胞仪测定和荧光显微镜观测细...

            【关键词】 绵羊成纤维细胞细胞转染转染效率

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            【中文期刊】 皮文辉  周平  等 《畜牧兽医学报》 2015年46卷5期 704-710页

            【摘要】 类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变.针对绵羊成纤维细胞生长因子5 (Fi...

            【关键词】 类转录激活因子效应物核酸酶基因组编辑成纤维细胞生长因子5基因

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            【中文期刊】 黄洋  靳辉  等 《畜牧与饲料科学》 2014年7期 14-15页

            【摘要】 旨在探寻10~14 d内G418致死绵羊耳成纤维细胞的最低浓度。试验设定了100~1000μg/mL的10个G418浓度梯度,加入绵羊耳成纤维细胞培养体系内,培养14 d。结果表明,当G418浓度为200~400μg/mL时,在10~14 ...

            【关键词】 绵羊成纤维细胞G418

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            【中文期刊】 毛志福  王立民  等 《畜牧兽医学报》 2013年44卷4期 528-534页

            【摘要】 旨在构建不饱和脂肪酸脱氢酶基因Fat-1表达载体,实现人泛素启动子UbB调控外源基因Fat-1在绵羊细胞内表达.PCR扩增得到UbB序列,秀丽隐杆线虫Fat-1基因密码子根据绵羊对同义密码子使用偏好性优化后,由公司合成获得oFat-1基因序...

            【关键词】 人泛素启动子UbBFat-1表达载体

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            【中文期刊】 孟凡华  肖红梅  等 《中国畜牧兽医》 2012年39卷3期 129-133页

            【摘要】 本研究以蒙古绵羊胎儿为材料,进行了胎儿性别鉴定,结果显示为雄性.取其皮肤组织进行离体培养,对所获得的细胞进行纯化,筛选出成纤维细胞.通过形态观察发现,在10代以内,细胞形态良好,随着代数增加梭型细胞有拉长趋势,在第20代时梭形明显拉长,单位...

            【关键词】 蒙古绵羊胎儿皮肤

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            【中文期刊】 张志崇  王春生  等 《经济动物学报》 2012年16卷1期 26-30页

            【摘要】 为了建立大量获取中国林蛙抗菌肽的方法,根据GenBank中的中国林蛙皮肤抗菌肽Temporin-1CEa基因的mRNA序列(EU624139)设计一对特异性引物,以提取的中国林蛙皮肤总RNA反转录出的cDNA为模板,将扩增的编码序列与pEA...

            【关键词】 中国林蛙抗菌肽绵羊成纤维细胞

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            【中文期刊】 孟凡华  王海涛  等 《畜牧与兽医》 2012年44卷12期 35-38页

            【摘要】 克隆绵羊角蛋白Kap6.1启动子,为下一步构建真核毛囊特异表达载体奠定基础.以绵羊基因组为模板,利用PCR方法克隆绵羊角蛋白结合蛋白Kap6.1启动子,并用此启动子置换真核表达载体pEGFP-N1的原始启动子CMV,构建pKap-EGFP质...

            【关键词】 绵羊角蛋白Kap6.1启动子克隆转染

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            【中文期刊】 陆健  宋正海  等 《中国畜牧兽医》 2012年39卷5期 14-19页

            【摘要】 Myostatin(MSTN)基因是胚胎期肌肉形成和出生后骨骼肌生长的主要调控因子之一,通过抑制肌细胞的扩增和分化而调控肌肉的生长和发育.为了进一步揭示MSTN在绵羊成纤维细胞中的生物学功能,采用RT-PCR从绵羊肌肉组织中扩增MSTN基因...

            【关键词】 myostatin绵羊成纤维细胞真核表达载体

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            【中文期刊】 赵健灵  安铁洙  等 《中国畜牧兽医》 2012年39卷5期 217-220页

            【摘要】 为建立利用内源诱导因子诱导绵羊体细胞为多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS)的方法,对绵羊Sox2基因进行克隆,并与pMXs连接构建逆转录病毒载体,将构建的载体转染293GP细胞以获得假病毒上清,利...

            【关键词】 绵羊成纤维细胞Sox2基因

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            【中文期刊】 唐大运  朱化彬  等 《畜牧兽医学报》 2011年42卷10期 1368-1373页

            【摘要】 旨在获得肌肉生长抑制素( Myostatin,MSTN)基因沉默的成纤维细胞系,为进一步探索Myostatin的调控机理,获得Myostatin的基因沉默的转基因羊奠定基础.针对小尾寒羊Myostatin的基因序列,设计4条siRNA干扰序...

            【关键词】 肌肉生长抑制素RNA干扰慢病毒

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            【中文期刊】 王春生  刘欣  等 《畜牧兽医学报》 2009年40卷8期 1262-1265页

            【摘要】 为了筛选转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株,本研究参照GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)设计并人工合成拟蜘蛛基因四聚体(4S),与pcDNA3.1载体(K2.10启动子)相连构建真核表...

            【关键词】 拟蜘蛛拖丝蛋白基因载体构建转染

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            【中文期刊】 安星兰  王子竹  等 《中国畜牧兽医》 2009年36卷12期 67-70页

            【摘要】 为了优化建立转染绵羊成纤维细胞系的外源基因转染体系,本研究利用带有绿色荧光蛋白(GFP)的外源基因,采用阳离子脂质体法,探讨了DNA用量、脂质体用量和转染时间等因素对转染绵羊成纤维细胞的影响.结果表明,在500μL转染培养基中成纤维细胞达到...

            【关键词】 质粒DNA绵羊成纤维细胞转染

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            【中文期刊】 黄兰兰  石国庆  等 《黑龙江动物繁殖》 2006年14卷2期 4-5页

            【摘要】 用组织块法对绵羊胚胎成纤维细胞进行原代和传代培养,探讨绵羊胚胎成纤维细胞适宜的培养模式.成功获得较均一稳定的细胞群体,并成功地对细胞进行了冷冻保存和复苏.对于进行大规模的动物细胞培养具有重要的指导意义.

            【关键词】 绵羊胚胎成纤维细胞

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            【中文期刊】 高爱琴  李宁  等 《畜牧兽医学报》 2006年37卷4期 326-330页

            【摘要】 根据人和小鼠成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因的同源序列设计引物对绵羊基因组进行PCR扩增,将扩增片段进行克隆和测序,并与人和小鼠的成纤维细胞生长因子5基因序列进行同源性比较,确定扩增的片段为绵羊的FGF5基因片段.采用PCR-SSCP技...

            【关键词】 绵羊成纤维细胞生长因子5基因PCR-SSCP

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            【中文期刊】 陈洋  赵杰  等 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》 2006年27卷2期 13-16页

            【摘要】 本文研究了成年绵羊皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化、冷冻和生长特征.对比了组织块培养和消化培养两种培养方法.根据上皮细胞与成纤维细胞对酶消化敏感性不同及二者贴壁速度的差异,将成纤维细胞分离纯化,建立成年绵羊皮肤成纤维细胞系.

            【关键词】 绵羊成纤维细胞培养

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            【中文期刊】 王红梅  刘明军  等 《中国畜牧杂志》 2004年40卷1期 8-10页

            【摘要】 从动物耳皮肤组织采样,采用将组织块剪碎后直接贴附于培养瓶底部的方法进行原代培养,该方法使原代细胞出现率及可传代率均达到100%.根据上皮样细胞和成纤维样细胞贴壁紧实程度的不同,用0.05%的胰蛋白酶-EDTA对其进行消化,可将两种不同类型的...

            【关键词】 畜牧、兽医科学基础学科成纤维细胞传染

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