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【中文期刊】 廖世奇 张春梅 等 《科学技术与工程》 2004年4卷2期 89-90,96页
【摘要】 当外源DNA以非定向的方式插入克隆载体时,需用测序或酶切的方法确定插入方向,上述两种方法或昂贵或费力.描述了一种快速、简便的PCR法,即利用载体的通用引物和目的片段的两个特异性引物直接扩增重组菌落,从而达到鉴别DNA插入方向的目的.
- 概要：
- 方法：
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【中文期刊】 木朝宇 庄晓亮 等 《安徽医科大学学报》 2014年9期 1198-1201,1202页ISTICPKUCA
【摘要】 目的探讨肠道病毒VP4基因通用引物PCR诊断非肠道病毒71型( EV71)非柯萨奇病毒A组16型( CoxA16)手足口病( HFMD)病毒方案的准确性。方法通过肠道病毒VP4基因通用引物PCR鉴定阜阳地区非EV71非CoxA16 HFMD...
- 概要：
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- 结论：
【中文期刊】 郭新勇 程晨 等 《西北植物学报》 2012年32卷1期 1-10页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 从已建立的天山雪莲cDNA文库中随机挑取单克隆,采用通用引物M13扩增出基因序列并测序,然后将该序列在GenBank中进行比对,根据该序列设计特异引物进行PCR,最终获得了冷调节蛋白基因siCOR的完整开放读码框(ORF)；构建植物表达载体...
- 概要：
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【中文期刊】 王明臣 宋宇 等 《中国老年学杂志》 2009年29卷14期 1758-1759页ISTICPKUCA
【摘要】 目的 构建前列腺癌(PCa)特异突变DNA聚合酶β(polβ)真核表达载体.方法 提取有特异DNA polβ突变的PCa组织的总RNA,通用引物逆转录成cDNA;用设计带有接头的DNA polβ全基因引物,PCR扩增PCa组织中呈现的突变型...
- 概要：
- 方法：
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【中文期刊】 崔静 黄爱龙 等 《生物技术通报》 2008年3期 99-102页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 通用引物与载体多克隆住点两端序列互补,将目的片段构建入栽体pGEM-T Easy中,利用载体通用引物M13F和M13R结合片段特异引物进行菌液PCR反应.用PCR产物电泳结果来筛选阳性克隆并鉴定目的片段插入方向,同时能有效对短插入片段重组子...
- 概要：
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【中文期刊】 李超伦 姜云涛 等 《上海交通大学学报（医学版）》 2007年27卷6期 652-654页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 建立牙周袋龈下菌斑中古细菌分布的基线信息,探讨其分布与牙周病发生的关系.方法 运用古细菌通用引物扩增菌斑标本,PCR产物连接TA载体,挑选多个克隆测序.其结果使用数据库比对并构建系统发育树分析.随机采集牙周病患者龈下菌斑标本,按照牙周...
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【中文期刊】 石磊 沈宜 等 《重庆医科大学学报》 2006年31卷6期 783-786,835页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:对奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌16s rRNA 3'～23s rRNA 5'间序列(16S～23S rRNA intergenic spacer region,ISR)进行克隆测序,为分子探针技术鉴定两菌奠定基础.方法:针对临床常见致...
【关键词】 奇异变形杆菌；洛菲氏不动杆菌；16s～23s rRNA间区；
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【中文期刊】 魏青 刘移民 等 《卫生研究》 2006年35卷5期 540-542页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建P4501A1基因cDNA Thr461→Asn461及Ile462→Val462突变载体,为进一步研究CYP1A1的功能和致癌机制奠定基础.方法 根据人CYP1A1基因(GeneBank NM-000499)cDNA序列设计通用...
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【中文期刊】 陆云华 马立新 等 《遗传》 2006年28卷2期 212-218页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 文章报道了一种简便、通用、高效的复杂载体构建方法.此法是在PCR引物设计时,在目的片段5′端加上随机设计的接头,利用PCR克隆目的片段,再用T4 DNA聚合酶3′→5′外切酶活性处理PCR克隆目的片段,产生多个首尾相匹配的黏性末端,进行多片...
- 概要：
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【中文期刊】 杨靖 张卫东 等 《中国人兽共患病学报》 2006年22卷2期 157-159,117页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的构建含有甲型流感病毒M2基因的真核表达载体并分析插入的M2基因序列.方法从接种人流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,用特异引物进行RT-PCR,扩增M2基因.通过分子克隆技术将所扩增片段克隆入真核表达质...
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【中文期刊】 卓勤强 刘昕 等 《第三军医大学学报》 2006年28卷5期 469-471页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的构建携带HPV亚型L1基因片段的标准细胞株.方法根据HPV通用引物GP5+/GP6+,用重叠延伸PCR方法合成HPV亚型L1基因中约150 bp片段;插入真核细胞表达载体EGFP-N1,用脂质体转染SPC细胞,筛选以获得带有不同HPV ...
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【中文期刊】 赵国强 秦冰 等 《郑州大学学报（医学版）》 2005年40卷4期 590-592页ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建携带野生型DNA聚合酶β基因(wtDNA polβ)的重组真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-polβ.方法:运用PCR方法,从质粒pcDNA3.1-polβ中扩增出wtDNA polβ的开放阅读框序列,T-A克隆至pGEM...
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【中文期刊】 宗红 李建生 等 《郑州大学学报（医学版）》 2005年40卷2期 291-293页ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建含TCRγV1基因的重组表达载体.方法:从人淋巴瘤Jurkat细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA克隆入VR1012质粒;转化感受态细菌E.Coli DH5e,以通用引物PCR扩增筛选阳性克隆,并双酶切鉴定;小量提取质粒进行测序...
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【中文期刊】 陈晓红 陈智 等 《浙江大学学报（医学版）》 2005年34卷2期 98-103页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库,为筛查与乙型肝炎肝硬化的发生特异相关的基因及探讨乙型肝炎肝硬化的发病机制奠定基础.方法:用Trizol方法提取人乙型肝炎肝硬化组织总RNA,并用mRNA纯化试剂盒进行mRNA纯化;反转录合成单链c...
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【中文期刊】 汤黎明 赵勤 等 《郑州大学学报（医学版）》 2005年40卷4期 581-583页ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建人CD154基因真核表达质粒pcDNA3.1-CD154,初步观察转染该质粒后Eca109细胞的细胞生物学特性.方法:人外周血单个核细胞体外经PHA激活后提取总RNA,用RT-PCR技术扩增人CD154 cDNA全长并构建真核表达...
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【中文期刊】 饶志明 赵有玺 等 《应用与环境生物学报》 2004年10卷6期 774-777页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 采用研磨/冻融和SDS/蛋白酶K热处理以及CTAB处理等理化方法,直接从太湖流域土壤样品中抽提得到微生物总基因组DNA.所得粗DNA用透析袋法以及Nucleaotrap suspension DNA纯化试剂盒进行了纯化.纯化过的DNA能够满...
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【中文期刊】 林俊堂 李玉昌 等 《遗传》 2004年26卷6期 793-796页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 抽提常氏肝癌细胞的总RNA,以oligo(dT)为引物,通过两次转换模板,采用LD-PCR合成全长cDNA,在cDNA两端引入SfiⅠ的酶切位点.以λTriplEX2为载体经过包装后构建了常氏肝癌细胞cDNA表达文库.以ADAMs通用抗体,...
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【中文期刊】 王骊丽 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 2004年20卷3期 363-365页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的: 构建表达人-鼠嵌合抗体的通用真核表达载体, 用于以嵌合抗体的形式表达PCR获取的小鼠抗体可变区基因, 以便将人-鼠嵌合抗体应用于临床治疗.方法: 用人Tac抗原信号肽以及人IgCκ基因和γ1CH基因, 构建人-鼠嵌合抗体的表达载体,...
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【中文期刊】 梁淑芳 翟朝阳 等 《微生物学杂志》 2003年23卷3期 1-4页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 根据Grover报道的Xanthomonas maltophilia CG类受体的342 bp核酸序列设计的一特异引物P2和随机引物进行PCR扩增,将约750 bp PCR产物克隆到pUCm-T载体上,得到重组质粒pUCm-Ter.pUCm...
【关键词】 嗜麦芽黄单胞菌；terminase-like蛋白；随机引物；
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【中文期刊】 赵国强 刘栋 等 《郑州大学学报(医学版)》 2003年38卷4期 480-483页ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建含突变型polβ基因重组表达载体.方法:从食管癌标本中提取总RNA,反转录合成cDNA,克隆入pCDNA3.1质粒.以通用鉴定引物PCR扩增、小量提取质粒酶切鉴定重组质粒,并进行测序.结果:测序结果证实重组载体中的外源片段序列与所...
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【中文期刊】 王志友 沈弢 等 《第一军医大学学报》 2002年22卷5期 409-411页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因.方法用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠重、轻链可变区的通用引物,通过PCR扩增基因,分别克隆入pMD18-T载体中,作核苷酸序列分析.结果用重链引物扩增获得...
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【中文期刊】 刘莉扬 马文丽 等 《西安医科大学学报》 2002年23卷3期 246-248,261页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的应用RD-PCR技术分离酵母基因.方法首先提取酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)总RNA,纯化mRNA;然后,反转录成双链cDNA;再用限制性内切酶Sau3AI酶切,在酶切片段上加上接头后,用通用引物U进行第一...
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【中文期刊】 汪俊云 杨玥涛 等 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 2001年19卷4期 217-220页MEDLINEISTICPKUCSCD
【摘要】 目的对扩增的墨西哥利什曼原虫环形DNA 1(CD1)部分片段进行测序,确定具有蛋白编码功能的开放阅读框. 方法通过脉冲电泳方法分离并使用琼脂糖酶方法回收CD1,酶切的CD1片段克隆于pZero载体,用M13通用引物自动测序决定核苷酸序列,用...
【关键词】 利什曼原虫；环形DNA1(CD1)；开放阅读框；
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【中文期刊】 李振华 丁爽 等 《世界中西医结合杂志》 2014年9卷9期 983-984,1013页ISTIC
【摘要】 目的 构建LIMK1-siRNA真核表达载体,为骨关节发病机制的研究奠定基础.方法 合成3条LIMK1的小RNA分子的寡聚脱氧核苷酸链,重组质粒测序,瞬时转染人软骨细胞,采用Western blot检测LIMK1表达情况.结果 Wester...
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【中文期刊】 曹峰子 伍诚意 等 《生物技术通讯》 2010年21卷3期 401-405页ISTICCA
【摘要】 目的:建立检测猪常见致病菌的反向斑点杂交方法.方法:将23S rRNA基因芯片用的针对12种细菌的25～30 mer探针加长到30～38 mer,2对通用引物序列不变.用地高辛标记下游引物,以尼龙膜为载体制备膜芯片,检验探针/膜杂交的特异性...
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【中文期刊】 《山西医科大学学报》 2009年40卷10期 877-881页ISTICCA
【摘要】 目的 研究DQ-1株VP7基因的基因分型,对DQ-1株VP7基因序列和糖蛋白VP7的蛋白质结构进行分析. 方法 通过RT-PCR技术扩增人A组轮状病毒DQ-1株VP7全长基因,并将RT-PCR产物连接到pMD18-T载体,转化大肠杆菌JM1...
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【中文期刊】 刘慧娟 冯志国 等 《生物技术》 2008年18卷2期 38-39页ISTICCA
【摘要】 目的:制备一套DNA分子量标准物.方法:利用多聚酶链式反应技术(PCR),以连接有9个不同大小DNA片段的pMD18-T载体为模板,M13引物为通用引物,进行大规模扩增,并进行2%琼脂糖凝胶电泳分析和利用Tanon GIS凝胶图像处理系统对...
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【中文期刊】 张会敏 冯友军 《生物信息学》 2005年3卷1期 1-4,18页ISTIC
【摘要】 以野生细菌F0303的总DNA为模板,采用细菌16SrDNA的通用引物,通过PCR的方法扩增到一条约1.5Kb的16SrDNA片段.连接到pGEM-T-easy克隆载体上,并用化学法转化E.coli DH5α。用EcoR I对5个随机皎取的...
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【中文期刊】 邢金良 杨向民 等 《世界华人消化杂志》 2004年12卷2期 271-275页ISTICCA
【摘要】 目的:构建一个在大肠杆菌中表达人鼠嵌合Fab抗体的通用载体,并用于抗人肝癌相关抗原HAb18G人鼠嵌合Fab抗体的表达.方法:利用特异引物PCR扩增人IgG3的CHl和Ck基因,分别克隆到表达载体pComb3中,从而构建成人-鼠嵌合Fab抗...
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【中文期刊】 郑峰 黄岚 等 《重庆医学》 2003年32卷7期 848-850页MEDLINEISTICCA
【摘要】 目的构建含有人诱导型一氧化氮合酶基因真核表达载体pcDNA3-iNOS.方法采用分子生物学技术,以Hind Ⅲ和XbI Ⅰ双酶切pSPORT-iNOS,电泳回收3.96kb编码人iNOS cDNA序列,克隆入真核表达载体pcDNA3的Hin...
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