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【中文期刊】 孙强正 熊衍文 等 《中国人兽共患病学报》 2008年24卷3期 224-228,275页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L lactis)食品级分泌表达载体,表达报告蛋白核酸内切酶(NucA).方法 PCR扩增乳酸乳球菌未知分泌蛋白(Usp45)编码基因的启动子、核糖体结合位点、分泌信号和成熟肽前1...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 孙强正 熊衍文 等 《微生物学报》 2008年48卷3期 293-298页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 为构建乳酸乳球菌食品级分泌表达载体,通过PCR扩增质粒pMG36e的p32启动子片段及乳酸乳球菌MG1363未知分泌蛋白(Usp45)基因的核糖体结合位点、分泌信号肽和成熟肽前11个氨基酸的编码序列(SPusp45),克隆到食品级载体pSH...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 赵颖怡 梁世中 等 《微生物学报》 2002年42卷4期 431-435页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 用化学法合成克鲁维酵母的菊粉酶基因的信号肽序列(INU),将其嵌入酵母附加型表达质粒pYES2,得到一套新型的分泌表达载体pYES2I,pYES2Ⅱ,pYES2Ⅲ.然后用PCR方法分别扩增大肠杆菌的天冬酰胺酶基因(ASN)和短芽孢杆菌α-乙...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 彭清忠 张惟材 等 《生物工程学报》 2002年18卷4期 438-441页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 应用PCR技术从具有分泌蛋白能力强且没有胞外蛋白酶活性的短短小芽孢杆菌50中分离出细胞壁蛋白基因的多启动子和信号肽编码序列,利用它与质粒pUB110和pKF3一起构建成穿梭分泌表达载体pBKE50.将α-淀粉酶基因引入该载体转化短短小芽孢杆...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 宁亚蕾 周立雄 等 《生物技术通讯》 2008年19卷3期 353-357页ISTICCA
【摘要】 目的:实现大肠杆菌分泌蛋白(Esp)A及EspA与白细胞介素(IL)-24融合蛋白的胞外分泌表达,进一步验证基于新月柄杆菌RsaA外运机制的原核胞外分泌表达载体系统的有效性和通用性,并改造优化该系统.方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 李德玲 李恩民 等 《癌变·畸变·突变》 2008年20卷6期 432-436页ISTICCA
【摘要】 背景与目的:应用酵母表达系统表达人的重要肿瘤分子标志物fascin蛋白.材料与方法:利用分子克隆技术将fascin基因完整编码区克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达载体pPIC9中,获得重组质粒pPICg-fascin;...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 马红丹 张丽媛 等 《食品科学》 2015年36卷1期 135-139页
【摘要】 为使大豆锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,MnSOD)在乳酸乳球菌中高效表达,将克隆的MnSOD基因开放阅读框序列分别重组到质粒pNZ8149和经改造的质粒pNZS上,表达载体pNZ-SOD和分泌表达载体pN...
【关键词】 锰超氧化物歧化酶(MnSOD)；食品级分泌表达载体；乳酸乳球菌；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 王海军 王艳芳 等 《黑龙江医药》 2010年23卷3期 328-331页CA
【摘要】 目的:构建人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)的卵清蛋白分泌表达载体,为建立鸡输卵管生物反应器奠定基础.方法:利用PCR手段,从鸡基因组DNA克隆了4.1k(-4050bp～+...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 郝春芳 徐虹 等 《高技术通讯》 2007年17卷11期 1192-1197页
【摘要】 通过Cyanobase藻类学数据库查询,从集胞藻6803转译后加工过程中的某些蛋白的分泌信号序列得到了可以用于分泌型表达的信号序列,进一步通过SignalP 3.0 Server分析软件预验证,从集胞藻6803得到4种不同蛋白的信号序列A、...
【关键词】 人表皮生长因子(hEGF)；信号肽序列；分泌型表达；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 邱晓燕 李碧欣 等 《中国组织工程研究》 2024年28卷7期 1000-1006页ISTICPKUCA
【摘要】 背景:干细胞来源胰岛β细胞移植被认为是治疗1型糖尿病的有效手段.人脐带间充质干细胞是理想的细胞来源,但其向胰岛β细胞分化的效率不高.目的:研究MAFA、PDX1修饰促进人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的潜能.方法:构建MAFA-PDX...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 谢恒月 唐鹰 等 《遗传学报》 2000年27卷4期 369-376页SCIMEDLINEISTICCSCDCABP
【摘要】 构建了一个含酿酒酵母PRO3基因的分泌型表达载体pCBy310,在pCBy310上插入ρHCG(人绒毛膜促性腺激素ρ亚基)-cDNA以形成一个重组质粒pCBy314.利用酿酒酵母脯氨酸合成酶基因缺陷株的独特属性,即它们不能在丰富培基中生长,...
【关键词】 用丰富培基作为选择压力；稳定遗传的分泌型载体；Pro+转化子；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 郭敏 雷清 等 《中国新药杂志》 2015年24卷3期 271-275,302页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:将胞内表达载体pAO815改建成分泌型表达载体,并体外构建戊型肝炎病毒ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,进一步比较不同转化子在毕赤酵母中的表达水平,以得到高表达重组菌株.方法:利用重叠PCR技术将α-factor信号肽基因与目...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 韩建军 胡三元 等 《山东大学学报（医学版）》 2010年48卷3期 78-82页ISTICPKUCA
【摘要】 目的 构建白介素24(IL-24)与内皮抑素(ES)的真核双基因表达栽体,检测它们在体外的表达.方法 从外周血和人胎肝组织中经RT-PCR分别扩增IL-24与ES cDNA序列,并将其定向克隆至真核双基因表达质粒pIRES中,重组质粒pIR...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 韩建军 胡三元 等 《山东大学学报（医学版）》 2010年48卷3期 78-82页ISTICPKUCA
【摘要】 目的 构建白介素24(IL-24)与内皮抑素(ES)的真核双基因表达栽体,检测它们在体外的表达.方法 从外周血和人胎肝组织中经RT-PCR分别扩增IL-24与ES cDNA序列,并将其定向克隆至真核双基因表达质粒pIRES中,重组质粒pIR...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 王敏 罗琴芳 等 《中国比较医学杂志》 2008年18卷7期 16-19页ISTICPKUCA
【摘要】 目的 构建致病性结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶(Early secretary antigenic target, ESAT-6)基因的pET原核表达载体,诱导表达并初步鉴定该蛋白.方法 设计特异性引物,用PCR方法从结核分枝杆菌标准株H37...
【关键词】 结核分枝杆菌；早期分泌性抗原靶ESAT-6；载体构建；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 宋琳 张志谦 《中国生物工程杂志》 2007年27卷5期 1-5页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为了便于收集和纯化, 重组蛋白常需要引导至真核细胞外.蛋白能否分泌主要取决于其是否含有信号肽, 由于不同信号肽诱导蛋白分泌的效率不同,高效信号肽的筛选已成为生物工程领域提高重组蛋白产量的重要策略之一.为了筛选诱导MMP-2 C末端PEX在C...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 张超 刘刚 等 《中国生物工程杂志》 2007年27卷1期 52-58页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 从毕赤酵母表达载体pPICZαA出发,构建了可直接克隆PCR产物的毕赤酵母分泌型表达载体(毕赤酵母表达型T载体),并通过表达重组纤维二糖水解酶Ⅱ对该载体进行了检验.设计合适的引物扩增一DNA片段,使该片段的上游含XhoⅠ和Eam1105Ⅰ酶...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 李瑞芳 张添元 等 《微生物学报》 2006年46卷5期 714-719页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 利用大肠杆菌质粒pSP72和枯草杆菌质粒pUB18共整合得到双功能克隆载体pSB.在pSB多克隆位点依次引入枯草杆菌果聚糖蔗糖酶基因启动子-信号肽序列sacB p.s.、地衣芽孢杆菌淀粉酶基因终止子序列α-amy T和短小芽孢杆菌增强子基因...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 杨湘越 兰小鹏 等 《实用医学杂志》 2006年22卷22期 2575-2577页ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建表达人干燥综合征抗原A(SSA)的毕赤酵母分泌型表达载体.方法:以人白血病淋巴细胞HL-60株cDNA为模板,RCR扩增目的基因SSA,纯化,双酶切,DNA浓缩回收,插入酵母分泌型表达载体pPIC9k,热冲击法转化感受态大肠杆菌J...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 王强 喻富根 《西北植物学报》 2005年25卷7期 1377-1382页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 为了探索利用植物分泌特性来表达重组蛋白的可行性,先构建了含钙网蛋白信号肽的植物双元载体pBIcal,再向该载体中插入霍乱毒素B亚单位编码基因,最后得到表达载体pBIcal-ctb.通过根癌农杆菌介导,该表达载体转化烟草,在卡那霉素抗性培养基...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 梁伟锋 张朝春 等 《微生物学报》 2005年45卷1期 34-38页MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 利用PCR技术扩增出pPIC9K载体的HIS4-Kan序列片段,与pPICZα重组,构建结合了两个载体特点的适合体外构建多拷贝基因表达盒的毕赤酵母表达载体pPICZα1,改造后的载体含HIS4-Kan序列,能整合到酵母染色体上,具有筛选方便...
【关键词】 多拷贝表达载体；人脑源性神经营养因子；毕赤酵母；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 刘林 赵志安 等 《生物工程学报》 2004年20卷6期 958-962页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为了获得结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在毕赤氏酵母中的高效表达,将人α-2a干扰素基因、结核分枝杆菌esat-6基因经PCR扩增并加上相应的酶切位点,两基因之间的DNA接头编码肠激酶识别的多肽,DNA经酶切连接插入分泌型载体pPIC9K,将重...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 王清路 张锐 等 《生物工程学报》 2004年20卷5期 730-735页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为获得高效表达外源蛋白的Pichia pastoris菌株而设计了重组质粒pPIC9K-vgbbxn,其中透明颤菌血红蛋白基因vgb胞内表达以提高菌体的发酵密度,腈水解酶基因bxn分泌表达.转化GS115菌株后,通过PCR、SDS-PAGE...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 蔡宏 潘怡 等 《中国人兽共患病杂志》 2002年18卷4期 1-4页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的对结核分枝杆菌的一种分泌蛋白MPT-64基因进行克隆,鉴定与表达,为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下基础.方法以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,用PCR法对基因MPT-64进行扩增,产物与载体质粒pGEX-4T-1构建...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 王宝林 翁心华 等 《上海医科大学学报》 2000年27卷4期 253-256页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 目的对分支杆菌的一种分泌蛋白Ag85B的基因进行克隆、表达，为结核病进行诊断打下基础。方法以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板，以PCR法对基因ag85b进行扩增，产物与载体质粒pET24b构建表达Ag85B的重组质粒，将此重组质粒先转...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 刘军 仇珍珍 等 《生物技术通讯》 2017年28卷6期 762-767页ISTICCA
【摘要】 目的:构建分泌表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E0蛋白的MDBK细胞系,并探究其传代和冻存稳定性.方法:用实验室制备的BVDV E0基因重组慢病毒感染MDBK细胞,荧光观察并收集MDBK细胞培养上清进行Western印迹分析,通过qPCR方...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 白娜 毛莹莹 等 《生物技术通讯》 2017年28卷4期 451-454,533页ISTICCA
【摘要】 目的:构建含结核分枝杆菌38kD蛋白基因的真核表达载体并转染HEK293T细胞,高效表达分泌性38kD蛋白.方法:设计合成的结核分枝杆菌38kD基因被克隆到T载体,然后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.0,经酶切鉴定正确后,PEI转染法导入...
【关键词】 结核分枝杆菌38kD蛋白；真核表达载体；分泌表达；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 王敏 席志文 等 《食品研究与开发》 2019年40卷7期 177-183页
【摘要】 为获得高活性的乳糖酶制剂,根据米曲霉乳糖酶基因序列以及宿主细胞乳酸克鲁维酵母GG799密码子的偏爱性,对米曲霉乳糖酶基因进行优化.将已优化的米曲霉乳糖酶lacA基因片段插入到乳酸克鲁维酵母GG799表达载体pKLAC1中,构建重组载体pKL...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 韦红玉 曾怡 等 《检验医学与临床》 2014年11期 1455-1457,1461页ISTICCA
【摘要】 目的：构建人类免疫缺陷病毒病毒 tat基因的重组分泌型真核表达载体并在真核细胞中表达，检测表达的重组蛋白活性。方法聚合酶链反应（PCR）从重组质粒pcDNA3．1（＋）/Tat中扩增tat基因，利用 HindⅢ和Bam HⅠ酶切位点分别将t...
【关键词】 人类免疫缺陷病毒病毒；tat基因；分泌型真核表达载体；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 魏庆宽 肖婷 等 《中国临床新医学》 2013年6卷3期 191-195页ISTIC
【摘要】 目的 探讨通过体外扩增乙肝表面抗原(HBsAg)基因,构建真核表达载体pcDNA3-HBsAg-ROP2的可行性.方法 根据乙肝S基因序列及pcDNA3-p30-ROP2酶切位点等情况设计、合成引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增HB...
【关键词】 乙肝表面抗原(HBsAg)；弓形虫；棒状体分泌抗原2(ROP2)；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 郝婷婷 马新廷 等 《江苏大学学报（医学版）》 2012年22卷1期 14-18页ISTICCA
【摘要】 目的:构建含有人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type I,HIV-1)负性调节因子(negative regulation factor,Nef)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced gr...
【关键词】 分泌性表达载体；人类免疫缺陷病毒I型负性调节因子；增强型绿色荧光蛋白；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 杨志广 刘林林 等 《中国实验诊断学》 2010年14卷3期 378-380页ISTIC
【摘要】 目的 构建带有小鼠分泌型内皮抑素(ssEndostatin)的原核表达载体pFLAG-ssEndostatin.方法 利用分子生物学方法,采用Kpn I内切酶将ssEndostatin从pcDNA3.1-Egr1-ssEndostatin质...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 刘林林 郭彩霞 等 《中国实验诊断学》 2009年13卷7期 863-865页ISTIC
【摘要】 目的 构建小鼠分泌型γ干扰素(IFN-γ)原核表达载体pFLAG-IFN-γ.方法 利用分子生物学方法,从pcDNA3.1-Egr1-IFN-γ质粒上将IFN-γ切下,然后连接到原核表达载体pFLAG-shift12TM上,构建成pFLAG...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 宁亚蕾 周立雄 等 《生物技术通讯》 2008年19卷2期 175-180页ISTICCA
【摘要】 目的:构建基于新月柄杆菌RsaA外运机制的以大肠杆菌为宿主的原核胞外分泌表达载体系统.方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将RsaA系统外运功能基因配合以异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒.以绿色荧光蛋白(GFP)为...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 陈蕞 陈建华 《药学进展》 2008年32卷12期 529-535页ISTICCA
【摘要】 综述乳酸菌表达系统在生化药物研发中的应用,包括用于活菌疫苗、活性酶、细胞因子以及各种蛋白和多肽类等药品的研制.乳酸菌作为安全的食品级微生物,用作活性蛋白表达和给药载体,特别是用于抗原的黏膜给药,显现出独特的优势和应用价值.
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 郑晓芳 赵敏 《化学与生物工程》 2017年34卷6期 6-11页
【摘要】 大肠杆菌是表达重组蛋白最常用的宿主菌之一,但是由于它大多将重组蛋白分泌到菌体内部,导致重组蛋白不能正确折叠或者被降解而失去活性,使得目的蛋白的提取和纯化过程较为繁琐.解决这些问题的方法之一就是将重组蛋白分泌到胞外培养基中,这样不仅有利于蛋白...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 王瑞珉 靳秋月 等 《武警医学院学报》 2005年14卷3期 178-180页ISTICCA
【摘要】 [目的]构建人血管抑素(angiostatin,As)原核分泌型融合表达载体pEZZ18-As,诱导表达As融合蛋白.[方法]根据人As cDNA序列的开放读码框架设计上、下游引物,从人肝组织中提取总RNA后,利用RT-PCR技术扩增As基...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 王瑞珉 李光明 等 《天津医科大学学报》 2005年11卷2期 195-197页ISTIC
【摘要】 目的:构建人血管抑素原核分泌型融合表达载体pEZZ18-As,诱导表达融合蛋白.方法:从人肝组织中提取总RNA,用RT-PCR的方法获得血管抑素基因,克隆到pEZZ18载体中,在E.coli DH5α中诱导表达.结果:成功构建人血管抑素表达...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 史业辉 曹水 等 《天津医科大学学报》 2004年10卷1期 1-4页ISTIC
【摘要】 目的:克隆人和小鼠的活化T细胞表达与分泌调节基因(RANTES基因)并分别构建腺病毒表达载体.方法:利用RT-PCR方法从人的扁桃体组织和小鼠的脾细胞中克隆RANTES基因并将其克隆入T-easy保存载体中,使用Stratagene公司的A...
【关键词】 活化T细胞表达与分泌调节基因(RANTES基因)；病毒载体；空斑试验；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 杨海杰 张军 等 《生物技术通讯》 2003年14卷6期 494-498页ISTICCA
【摘要】 以本室构建的原核表达载体pTO-T7为基础载体,PCR合成ompT引导序列,插入该载体多克隆位点上游,构建了分泌型原核表达载体pTO-OT.将2个外源基因克隆至pTO-OT,2个重组质粒在大肠杆菌中均得以高效表达,表达量为25%～30%.W...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
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