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【中文期刊】 李庆华 庞天翔 等 《生物化学与生物物理进展》 2005年32卷8期 781-787页 SCIISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 RNA结合蛋白Sam68是细胞有丝分裂期Src酪氨酸磷酸化的靶蛋白.尽管确切机制尚不清楚,一些人还是认为Sam68可通过调控RNA的代谢参与细胞周期调控.利用基因打靶技术,在DT40细胞分离出Sam68基因缺失的细胞系.利用该细胞系,进行S...
【中文期刊】 李昊 陈胜男 等 《中国实验动物学报》 2019年27卷3期 271-277页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为建立肌肉特异表达Cas9小鼠动物模型奠定基础.方法 设计小鼠Rosa26位点sgRNA并通过体外酶切验证活性,同时使用同源重组构建肌肉特异性同源打靶载体;通过显微...
【中文期刊】 张传生 杜立新 《动物学报》 2005年51卷4期 685-690页 SCIMEDLINEISTICCSCDBP
【摘要】 利用胚胎干细胞基因打靶技术制备转基因鸡是研制鸡输卵管反应器的最佳技术路线.为建立基于Cre/loxp系统的鸡卵清蛋白基因(Ovalbumin gene,OV)位点的双交换打靶载体系统,本研究克隆了鸡的OV基因7.8 kb片段,并与克隆的内部...
【中文期刊】 沈伟 闵令江 等 《遗传学报》 2005年32卷4期 366-371页 SCIMEDLINEISTICCSCDCABP
【摘要】 构建了山羊β-酪蛋白基因座基因打靶载体pGBC-GFP-neo,载体包含了正负筛选标记基因neo和tk,以及无启动子的GFP基因.打靶载体线性化后用脂质体包裹转染山羊乳腺上皮细胞,利用G418和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选,共得到抗性...
【中文期刊】 周常文 傅继梁 等 《遗传学报》 2000年27卷8期 659-665页 SCIMEDLINEISTICCSCDCABP
【摘要】 为了在小鼠胚胎干细胞（ES）中引起神经细胞cdc2类激酶调节亚基p35Nck5a基因的定点重复，采用常规的分子克隆技术，构建得到长约12.2kb的基因重复性打靶载体pGDTV。用电穿孔法将线性化的pGDTV载体转入ES细胞，经过G418和G...
【关键词】 p35Nck5a基因； 基因打靶； 胚胎干细胞；
【中文期刊】 刘连 郭嘉亮 等 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 2017年38卷3期 200-204页 ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建一个基于博来霉素筛选的核糖体区基因打靶载体,为后续的基因打靶研究奠定基础.方法:首先选择含有博来霉素(zeocin)抗性的目的片段与载体连接,并进行单酶切及测序鉴定,最终构建基于博来霉素筛选核糖体基因打靶载体平台.结果:构成pUC...
【中文期刊】 陈莹 彭晓珏 等 《热带亚热带植物学报》 2012年20卷6期 642-648页 ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 对植物基因打靶技术的原理、操作程序、打靶效率的影响因素及其在植物中的应用现状进行了综述,并就如何有效地提高打靶效率提出了建议,同时对该技术在植物学研究领域中的应用前景进行了展望.
【中文期刊】 罗庆苗 苗向阳 等 《遗传》 2011年33卷5期 449-458页 MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 转基因技术经过数十年的发展日渐成熟,并推动转基因技术研究进入一个新的发展阶段.文章综述了体细胞核移植技术、慢病毒载体法、转座子介导的基因转移法、RNA干扰介导的基因敲除法和锌指核酸酶-基因打靶技术等近年发展起来的方法.而近来诱导多能干细胞(...
【中文期刊】 钟强 赵书红 《遗传》 2011年33卷2期 123-130页 MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 锌指蛋白核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN)因其能特异性识别并切割DNA序列以及可设计性,被用于基因定点突变和外源基因定点整合.目前,ZFN技术以其准确的靶位点设计能力和诱发高效率基因打靶的优势,越来越受到基因改造研...
【中文期刊】 袁进 顾为望 《中国比较医学杂志》 2008年18卷1期 58-62页 ISTICPKUCA
【摘要】 人类疾病动物模型在医学研究中起着非常重要的作用,而自然发生的人类疾病已远远不能满足医学研究的需要.利用基因打靶技术开展人类疾病动物模型的研究具有广阔的应用前景.本文就基因打靶技术及其在人类疾病动物模型研究中的应用做一介绍.
【中文期刊】 蒋泓 曾芳 等 《中国生物工程杂志》 2008年28卷12期 36-40页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 设计表达了4个锌指核酸酶,用于切断人基因组中的rRNA基因家族的内部转录间隔序列,造成双链断裂,以此提高针对多位点基因打靶的效率,为后续基因打靶应用于基因治疗研究奠定基础.首先,在人rRNA基因家族ITS1序列中找到2个合适的9 bp长的序...
【中文期刊】 陈兴启 孙达权 等 《生物工程学报》 2008年24卷10期 1818-1823页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为了构建适合大多数基因座位点打靶的通用型基因打靶载体及打靶成功后去除正选择标记基因,以克隆载体pGEM-3Z为骨架,插入了一个正选择标记基因新霉素磷酸转移酶基因(neo).两个相同的负选择标记基因单纯疱疹病毒胸苷激酶基因HSV-tk1和HS...
【中文期刊】 熊耀斌 傅缨 等 《医学与哲学》 2008年29卷9期 73-74,79页 ISTICPKU
【摘要】 2007年度诺贝尔医学奖项目--基因打靶,由三腿和一个平台所构成.三条腿分别是转基因学、同源重组和胚胎干细胞,一个平台指的是基因敲除.除了评价这些组成部分以外,还对推迟评奖进行了质疑.
【中文期刊】 唐冬生 李芳 等 《生物工程学报》 2007年23卷2期 241-245页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 以莱航鸡重复的rDNA基因间的间隔序列为靶位点,利用BAC重组酶系统构建含人干扰素基因的多位点基因打靶载体,为建立莱航鸡多位点基因打靶技术获得关键材料.首先构建BAC-TDN筛选载体,然后构建pYLVS-GID表达载体.将BAC-TDN筛选...
【中文期刊】 赵红萍 吴补领 等 《中华微生物学和免疫学杂志》 2006年26卷5期 409-413页 ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 目的利用基因打靶技术构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白D基因(gbpD)失活株,用于葡聚糖结合蛋白D基因功能的研究.方法体外培养变异链球菌UA159菌株并以其基因组为模板,对gbpD基因内部序列进行PCR扩增,连接自杀载体pVA8912,分别用酶...
【中文期刊】 蒋泓 唐冬生 等 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 2006年27卷3期 470-475页 ISTICPKUCA
【摘要】 以奶牛为研究对象,以其重复的rRNA基因间的间隔序列为靶位点,基于BAC重组酶系统构建多位点基因打靶载体,为建立体内多位点基因打靶技术获得关键材料.首先构建BAC-TDN筛选载体,然后构建pYLVS-GD表达载体.将BAC-TDN筛选载体和...
【中文期刊】 冯丽玲 杨瑞仪 等 《中草药》 2006年37卷12期 1857-1861页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 通过代谢途径工程调整代谢流向,试图增大转基因青蒿Artemisia annua植株中的青蒿素产量.方法 利用青蒿鲨烯合酶(SS)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因和胞嘧啶脱氨酶(CodA)基因构建基因打靶载体,并通过冻融法将载体导入根癌...
【中文期刊】 王宏 沈子龙 等 《中国药科大学学报》 2005年36卷1期 73-77页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:利用体细胞基因打靶技术来获得定点整合有重组人瑞替普酶(rPA)的山羊胎儿成纤维细胞株.方法:构建了针对山羊β-酪蛋白基因座的定点打靶载体,其上游同源臂为β-酪蛋白启动子端同时包含其信号肽编码区长约6.1 kb的基因组片段,下游同源臂为...
【中文期刊】 冯丽玲 杨瑞仪 等 《中草药》 2005年36卷4期 578-582页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的为了验证CodA基因是否适宜作为有效的青蒿基因打靶负选择标记.方法用PCR法扩增大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因CodA,经克隆和测序后插入植物基因表达载体pROKⅡ,并导入根癌农杆菌LBA4404(pAL4404)中.以共培养法转化青蒿叶盘,...
【中文期刊】 张会东 鲍朗 等 《中华微生物学和免疫学杂志》 2005年25卷7期 544-548页 ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 目的将外膜蛋白新基因ompL17靶向敲除并构建该基因的突变株. 方法提取钩端螺旋体017株基因组DNA,扩增出外膜蛋白新基因ompL17,与打靶载体p2NIL重组,并插入氨苄抗生素抗性基因Ampr+使外膜蛋白新基因ompL17失活,构建重组...
【中文期刊】 习阳 刘祥林 等 《植物生理学通讯》 2004年40卷3期 369-372页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 介绍了基因打靶技术在新型模式植物小立碗藓(Physcomitrella patens)中的应用.
【关键词】 小立碗藓(Physcomtrella patens)； 基因打靶； 同源重组；
【中文期刊】 沈伟 杨正田 等 《生物工程学报》 2004年20卷3期 361-365页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 利用体细胞基因打靶与核移植技术制备动物乳腺生物反应器是当今转基因定位整合表达的一种新技术.分别克隆山羊的β-酪蛋白基因5′调控区的6.3kb片段,外显子7、外显子8和9三个基因片段,并与克隆的人tPA突变体cDNA一起构建了含有neo和tk...
【中文期刊】 董文 李卫 等 《遗传》 2004年26卷4期 560-566页 MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 苔藓植物具有相对简单的发育模式,单倍体的配子体在其生活史中占主导地位,作为研究植物生物学过程的模式系统具有诸多的优越性.苔藓植物小立碗藓能够高效地通过同源重组的方式将外源核酸整合到其核DNA,这就使得基因打靶在此物种中就像在小鼠胚胎干细胞和...
【中文期刊】 韦相才 钟兴明 等 《中国人兽共患病杂志》 2004年20卷12期 1045-1048,1061页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体,建立基因敲除突变株,为进一步探讨SAG3功能和弓形虫侵入宿主细胞机制提供可行的研究方法.方法用基因克隆方法将 SAG3 1.53kb和 2.81kb 两个同源序列分别插入TUB5/CAT质粒中,构建...
【中文期刊】 沈伟 杨正田 等 《生物工程学报》 2003年19卷6期 767-770页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 在转基因动物研究中,由于基因表达调控元件的人工拼接和外源基因在动物基因组中随机整合所带来的"位置效应",致使转基因动物外源基因的表达水平不高并且差异较大.为此,利用定位整合优势,对以基因同源重组为基础的基因打靶技术进行了大量研究.介绍了就利...
【中文期刊】 杨瑞仪 曾庆平 《中国生物工程杂志》 2003年23卷5期 69-73页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 基因打靶是反向遗传学的基础工具,它通过同源重组置换染色体内的基因用于复杂基因组的基因功能分析.但是,在植物中,外源DNA的插入主要是非序列依赖的非同源末端连接方式,基因打靶频率很低,只有10 -5～10 -4的水平.综述了近年来为了提高植物...
【中文期刊】 林福玉 邓继先 等 《中国生物工程杂志》 2003年23卷2期 1-6页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 基因打靶技术制备乳腺生物反应器,克服了显微注射法的众多缺陷,并随着第一例基因打靶家畜的诞生而成为这一研究领域的热点.本文从制备乳腺生物反应器过程中基因打靶策略、打靶细胞到打靶位点的选择等各个方面,详细分析了其中的技术难点、解决问题的对策、国...
【中文期刊】 李湘萍 徐慰倬 等 《遗传》 2003年25卷1期 81-88页 MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上,可对基因组进行定位修饰的实验方法,尤其可以在转基因动物的遗传性状修饰中起到巨大的作用.本文简述了转基因、体细胞克隆和基因打靶的研究历史,以及这些技术对转基因动物制备的影响和展望.
【中文期刊】 李瑞国 《中国生物工程杂志》 2003年23卷10期 37-41页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 转基因效率与外源基因表达水平低的现状一直是制约动物生物反应器研究与产业化的主要技术瓶颈.体细胞克隆动物的成功和胚胎干细胞基因打靶技术的逐步完善使得体细胞基因打靶与核移植技术的结合使用成为可能,这就为生产遗传修饰家畜提供了一种新的手段,为动物...
【中文期刊】 薛猛 《生物学杂志》 2002年18卷1期 7-8页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 基因打靶在人类遗传病动物模型的构建、基因治疗和基因功能研究等方面都有重要的作用.本文综述了一些常用的基因打靶策略,并对这些技术的研究进展作一介绍.
【中文期刊】 刘红全 戴继勋 等 《遗传》 2002年24卷6期 707-711页 MEDLINEISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 基因打靶技术是一项新兴的分子生物学技术,是利用外源DNA与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组,并整合在预定位点上,从而改变细胞遗传特性的方法.它的产生是遗传工程领域的一次革命,为发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个...
【中文期刊】 李涛 卢圣栋 《中国生物工程杂志》 2002年22卷2期 56-60页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 时空特异性基因打靶以源于大肠杆菌噬菌体P1的Cre/loxP系统为基础,可以在特定的发育阶段和特定的组织细胞中对几乎任何基因进行遗传修饰,已成为基因突变和染色体畸变等研究领域的有力工具.
【中文期刊】 谭晓红 杨晓 等 《生物工程学报》 2001年17卷2期 118-120页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 显微注射技术本身固有的缺点在很大程度上限制了转基因动物的研究及应用.近年来,体细胞基因打靶和体细胞克隆的最新研究进展表明,这两种技术相结合将成为制备大型转基因动物的有效途径.
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