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【中文期刊】 肖庚富 齐义鹏 等 《生物化学与生物物理进展》 2000年27卷1期 96-98页 SCIISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 介绍一种质粒DNA快速转化方法.质粒DNA加入感受态细胞,冰浴3～10min,涂布预热到37℃的平板,即可获得与常规转化方法相当的转化效率.操作步骤由5步减至2步,时间由2h减至3～10min.同时探讨了Ca2+浓度、4℃保存时间等因素对感...
【中文期刊】 王永刚 孙尚琛 等 《微生物学杂志》 2016年36卷2期 20-24页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 为研究金属离子诱导下感受态细胞形成的机理及揭示转化发生的机制，分别用 Ca2+和 Sr2+（0~140 mmol/ L）制备大肠埃希菌感受态细胞并转化。研究结果表明，不同浓度的 Ca2+和 Sr2+诱导的感受态细胞的效价不同，两种金属离子对...
【中文期刊】 吴行伟 刘泽源 等 《中国药理学通报》 2012年28卷4期 584-587页 ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 目的 比较几种常用大肠杆菌感受态制备方法,探讨影响pBV220-PTD-tCNTF转化大肠杆菌感受态细胞的因素并得出最优水平组合.方法 采用4种制备感受态细胞的方法即CaCl2法,CaCl2 -甘油法,TSSG法和INOUE法,比较4种方法...
【中文期刊】 周传文 李倩君 《中国组织工程研究与临床康复》 2010年14卷41期 7687-7690页 ISTICPKUCA
【摘要】 背景:研究表明Snai1和E-钙黏素在肿瘤组织中有负向表达关系,且与Snai1与CDH1启动子区box盒结合,抑制CDH1基因转录.目的:构建针对snai1的高表达载体,建立稳定转染的细胞株.方法:根据GenBank中snai1的基因序列人...
【关键词】 锌指转录因子snai1； 表达质粒； 感受态细胞；
【中文期刊】 王友如 《生物技术》 2011年21卷1期 47-49页 ISTICCA
【摘要】 目的:质粒DNA转化时,比较不同的冰浴时间、热休克时间、预培养时间对转化效率的影响.优化质粒DNA转化方法,缩短了转化时间,该方法可获得与常规转化方法相当的转化效率.方法:质粒DNA加入感受态细胞中,混匀冰浴5min,42 ℃热休克60s,...
【中文期刊】 薛亮亮 司苏晋 等 《山西医科大学学报》 2010年41卷4期 322-324页 ISTICCA
【摘要】 目的 观察甲基化缺陷的大肠杆菌DM1菌株与普通DH5α菌株感受态转化效率的差别.方法 用常规氯化钙法制备二者的感受态细胞,质粒转化后计算转化率.结果 DM1菌株感受态细胞转化率为(2.2±0.3)×106 CFU/μg,DH5α菌株感受态细...
【中文期刊】 顾长国 贾淑芳 等 《西南国防医药》 2009年19卷5期 507-508页 ISTICCA
【摘要】 目的:优化外源性DNA导入XL1-blue菌株电转化条件,摸索构建噬菌体抗体库构建过程较优化的电转化条件.方法:培养XL1-blue菌株,在不同培养时间制作感受态细胞,应用不同电压分别作电转化,并对其转化效果进行鉴定,确定较好的培养时间和电...
【中文期刊】 张晓楠 肖玉 等 《中国现代医学杂志》 2008年18卷4期 466-468,472页 ISTICCA
【摘要】 目的 探讨影响大肠杆菌DH5 a电转化效率的几个关键但易被忽略的因素.方法 于室温(25℃)用空气浴振荡和水浴振荡培养大肠杆菌DH5 a,用10%(V/V)甘油-水溶液和10%(V/V)甘油-生理盐水溶液冻存所制感受态细胞.在电压2.5kv...
【中文期刊】 游雷鸣 翁海波 等 《生物技术》 2007年17卷2期 37-40页 ISTICCA
【摘要】 目的:分析大肠杆菌JM109感受态形成因素,提高转化效率.方法:采用不同生长状态、不同转化溶液、不同保存时间及热激处理时间的细菌制备感受态,分析转化效率.结果:以20mmol/L MgCl2+80mmol/L CaCl2为处理液,经活化培养...
【中文期刊】 李代宗 赵晓瑜 等 《生物技术》 2006年16卷6期 55-57页 ISTICCA
【摘要】 目的:为了获得重复性好、转化率高的少量制备感受态细胞的方法,利用不同生长时期的大肠杆菌感受态细胞,进行转化比较.方法:根据普通实验室的实验条件,常规方法提取质粒,氯化钙法转化不同生长时期的大肠杆菌感受态细胞,比较转化率.结果:大肠杆菌感受态...
【中文期刊】 罗婵 汤刚彬 等 《生物技术》 2005年15卷1期 52-54页 ISTICCA
【摘要】 目的:确立一个能制备高转化率感受态细胞并长期维持其感受性的实验方案.方法:比较CaCl2法、TSS法、超高效法制备感受态细胞的效果,选用三者中较好的方法进一步探讨不同生长期(OD值0.2～1.1)的细菌对制备感受态细胞的影响,并分别比较了不...
【中文期刊】 李振宇 徐开林 等 《徐州医学院学报》 2004年24卷4期 315-316页 ISTICCA
【摘要】 目的研究氯化铷法制备感受态细胞的转化效率和不同条件对其的影响.方法采用氯化铷法制备感受态细胞,用不同的质粒进行转化.分析不同菌种、冻存时间对转化效率的影响,并与通常所使用的氯化钙法进行转化效率的比较.结果氯化铷法制备感受态细胞可用于不同的质...
【中文期刊】 张岚岚 徐春燕 等 《细胞生物学杂志》 2004年26卷4期 429-432页 MEDLINEISTICCSCDCA
【摘要】 探讨了大肠杆菌菌株、细菌生长状态、转化溶液、抗冻剂及保存时间、质粒长度和纯度对感受态细胞转化能力的影响.结果表明,以100 mmol/L CaCl2为缓冲液,采用经活化培养的A600为0.55的TGl制备的感受态细胞,在冰上放置6h后转化,...
【中文期刊】 唐雪明 邵蔚蓝 等 《生物技术》 2002年12卷4期 13-15页 ISTICCA
【摘要】 芽孢杆菌在营养缺乏的饥饿状态下,细胞易产生感受态因子,处于生长芽孢时期的芽孢杆菌更容易产生感受态.基于此原则利用芽孢杆菌极限营养培养基通过体外处理诱导使地衣芽孢杆菌产生感受态性能,同时调整参数,建立了感受态细胞对质粒pAPR的高效电转化方法...
【中文期刊】 谢堃 乔军 等 《畜牧兽医学报》 2015年46卷6期 998-1003页
【摘要】 拟构建单核细胞增生李斯特菌(LM)非编码RNA rli87基因缺失株,对其进行分子鉴定,分析rli87基因缺失对LM生长的影响.用融合PCR方法构建LM-SB5 rli87基因缺失突变体,并构建pKSV7-Δrli87穿梭载体,将其转化入L...
【中文期刊】 任大勇 李昌 等 《中国兽药杂志》 2012年46卷1期 5-9页
【摘要】 以乳酸菌诱导型表达质粒pNZ8149为载体，Lactococcus lactisNZ3900为受体，采用电转化方法研究电场强度、电击杯规格、受体菌株的生长状态、感受态细胞浓度及分装体积、质粒浓度、电击脉冲时间以及电击杯使用次数等因素对电转化...
【中文期刊】 陆雁 王青艳 等 《广西科学院学报》 2012年28卷2期 117-119页
【摘要】 用构建好的重组质粒转化枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）WB600感受态细胞，进行不同时间预培养后，涂布于抗生素平板培养，研究一种更高效的转化方法。用载体与外源片段的连接产物转化WB600感受态细胞，进行最佳预培养时间培养后...
【中文期刊】 罗锋 余腾 等 《江汉大学学报：自然科学版》 2011年39卷3期 82-85页
【摘要】 通过研究转化实验中加入质粒DNA的量、大肠埃希菌感受态细胞制备和质粒转化过程中冰置时间长短对感受态细胞最终转化效率的影响,分析其最佳转化效率参数,优化感受态制备和转化方法.结果表明,加入质粒（pBR322）DNA量为1～10ng,感受态制备...
【中文期刊】 王世伟 李旭业 等 《齐齐哈尔大学学报（自然科学版）》 2009年25卷2期 86-90页
【摘要】 通过研究不同生长状态、处理溶液、保存时间及热激时间对感受态细胞制备的影响,分析了影响大肠杆菌株JM109和DH5α感受态细胞形成因素,优化了制备感受态细胞的方法.结果表明,OD600为0.43的大肠杆菌菌液经处理液(20 mmol/L Mg...
【中文期刊】 唐颜苹 王小媚 等 《华中农业大学学报》 2008年27卷6期 745-748页
【摘要】 研究了保存时间、温度和抗冻剂对大肠杆菌感受态细胞保存的影响.结果表明:在4℃、-40℃、-70℃条件下,大肠杆菌感受态细胞转化效率在保存前期随保存时间增加呈上升趋势,转化效率在第1天或第7天达到最大值,此后随保存时间增加而呈下降趋势;在保存...
【中文期刊】 房功思 《安徽卫生职业技术学院学报》 2008年7卷2期 96-97页
【摘要】 目的:比较、论述实验室常用的几种大肠杆菌感受态细胞制备方法.方法:比较氯化钙法、甘油一聚乙二醇法、氯化铀法、一步法四种大肠杆菌感受态细胞制备方法.结果:几种技术均可满足实验室要求.结论:各种方法都有优、缺点,须根据实验室具体情况选择适当方法...
【中文期刊】 张卫林 赵晶 等 《安徽农业科学》 2007年35卷30期 9571-9571页
【摘要】 确定大肠杆菌DH5α氯化钙转化法时感受态细胞与质粒混合物的最佳冰浴时间.方法:在保证其他条件一致的情况下,设置大肠杆菌感受态细胞和质粒混合物的冰浴时间梯度并建立阴性对照进行研究.结果:冰浴20 min时转化效率最高.结论:与其他冰浴时间相比...
【中文期刊】 李欣 杨坤宁 等 《食品与生物技术学报》 2007年26卷6期 48-51页
【摘要】 为了制备高转化效率的E.coli TG1和E.coli DH5α感受态细胞,采用电转化方法探索E.coli生长对数期的不同生长阶段、质粒DNA含量、电场强度对E.coli转化效率的影响.研究结果表明:40 μL菌液中加1.0 ng pUC1...
【中文期刊】 温建新 李志辉 等 《动物医学进展》 2007年28卷5期 9-12页
【摘要】 研究不同型号的菌株、不同转化溶液、感受态细胞的存放时间、转化时间及转化后的复苏时间等对质粒转化效率的影响.结果表明,转化溶液浓度和感受态细胞的存放时间对转化效率有明显的影响,而转化时间、冰浴时间和转化后的振荡培养复苏时间对转化效率的影响不明...
【中文期刊】 吴海燕 谢应桂 等 《湘南学院学报（医学版）》 2006年8卷3期 13-15页
【摘要】 目的 探讨在不同转速下大肠杆菌OD600值与时间的关系,为能快速而准确的制备高效感受态细胞提供OD600值的量化标准.方法 在不同转速下每隔一定时间测定大肠杆菌OD600值.结果 总结了不同转速下OD600值在0.3～0.4所需时间段,并且...
【中文期刊】 涂知明 陈明洁 等 《华中科技大学学报（自然科学版）》 2006年34卷4期 112-115页
【摘要】 描述了一种改良的高效细菌感受态的制备和感受态细胞的保藏及细菌的转化方法.三种不同的大肠杆菌分别是DH5α, TG1 和 XL1 blue,其中最有效的是XL1 blue.每种菌株的感受态细胞制备的最佳光密度(OD600值)不同.对感受态细胞...
【中文期刊】 李明才 何韶衡 《汕头大学医学院学报》 2005年18卷4期 228-230,241页
【摘要】 目的:建立一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化的方法.方法:质粒DNA加入感受态细胞,经短暂冰浴和热休克后,直接涂布预热至37℃的平板. 以大肠杆菌DH5α为受体菌,研究CaCl2溶液浓度、感受态细胞的存放时间、转化时间及转化后...
【中文期刊】 韩峰 褚艳 等 《高技术通讯》 2003年13卷9期 30-34页
【摘要】 在18℃和37℃振荡培养大肠杆菌DH5α并制备感受态细胞,用Eppendorf公司的Multiporator电转移仪进行电穿孔转化,研究了培养温度对转化效率的影响.实验结果表明,低温(18℃)培养的细菌,回收时的OD600值在0.5～1.0...
【中文期刊】 黄庆华 吴兰 等 《江西科学》 2003年21卷4期 321-324页
【摘要】 同源重组是生物界普遍存在的现象,从噬菌体、细菌到真核生物都有能发生同源重组的种类.如何把同源重组应用到基因克隆中成为近年来生物学家研究的热点.本文从宿主细胞的改造、重组功能的诱导、感受态细胞的制备、线性同源载体的获得及重组体的鉴定等几个方面...
【中文期刊】 唐雪明 邵蔚蓝 等 《无锡轻工大学学报》 2002年21卷5期 460-463页
【摘要】 通过体外处理诱导地衣芽孢杆菌产生感受态性能,同时调整参数,建立了感受态细胞对质粒pAPR的高效电转化方法.当质粒DNA为1.5 μg/mL、转化时电压为1 750 V时,可得到261个转化子,经鉴定均为阳性克隆子.此为以芽孢杆菌为宿主进行高...
【中文期刊】 谢志雄 陈向东 等 《武汉大学学报(理学版)》 2002年48卷2期 253-256页
【摘要】 对数生长前期的大肠杆菌在生理盐水中用CaCl2可以直接诱导建立感受态并完成转化过程.利用H-8100透射电子显微镜观察用CaCl2直接在生理盐水中诱导建立感受态的大肠杆菌细胞,发现感受态细胞整体电子密度趋于均匀,但存在有电子密度较高颗粒,表...
【中文期刊】 尹舒贤 赵月华 等 《中国生物工程杂志》 2017年37卷7期 88-96页 ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:外源RNA导入细胞特异性上调或下调基因表达,目前外源RNA的制备方法主要有化学合成、体外转录、细胞提取.Alu DNA和Alu RNA是人基因组和转录组中最重要的成分,参与基因表达调节.建立工程菌制备基因工程人源Alu RNA (Al...
【中文期刊】 韩岳峰 焦明 等 《食品与生物技术学报》 2024年43卷5期 19-25页
【摘要】 为建立鼠李糖乳杆菌细菌素替抗、防腐应用平台,探究鼠李糖乳杆菌细菌素的抗菌特性,利用DNASTAR软件对鼠李糖乳杆菌细菌素进行全基因序列分析,确定了鼠李糖乳杆菌细菌素的主要调控基因为wo-a/2,利用原核表达的方法表达细菌素WO-A/2,并对...
【中文期刊】 司苏晋 刘田福 等 《中国生物制品学杂志》 2010年23卷5期 533-535,538页 ISTICCSCDCABP
【摘要】 目的 优化高转化效率甲基化酶缺陷的大肠杆菌DM1感受态细胞的制备条件.方法 采用不同生长状态、转化冰浴时间、热激时间及转化后复苏时间的大肠杆菌DM1制备感受态细胞.分析转化效率.结果 A600值为0.39和0.69的菌液制备感受态细胞,转化...
【中文期刊】 吴劲风 叶冬平 等 《中国组织工程研究》 2013年2期 259-263页 ISTICPKUCA
【摘要】 背景:椎间盘髓核细胞分离培养困难,老化较快,迫切需要一种标准细胞株用于实验研究.目的:探讨人端粒酶反转录酶重组绿色荧光表达载体的构建及其转染正常髓核细胞构建永生化细胞的可行性研究.方法:通过目的基因克隆、真核表达质粒中目的基因序列测定、目的...
【中文期刊】 王博涵 余虓 等 《中国组织工程研究》 2013年7期 1238-1242页 ISTICPKUCA
【摘要】 背景:KLF4基因在细胞分化过程中有重要作用.目的:构建 KLF4基因慢病毒过表达载体.方法:聚合酶链反应扩增(PCR)目的基因 KLF4后插入慢病毒表达载体 pCDH 中,构建重组载体pCDH-KLF4.通过 PCR、双酶切和 DNA 测...
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