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【中文期刊】 王永飞 邓博文 等 《中国畜牧兽医》 2024年51卷2期 689-699页
【摘要】 [目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础.[方法]采用重叠延伸P...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 焦凤娟 刘俊杰 等 《吉林大学学报（医学版）》 2022年48卷5期 1109-1115页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:基于重叠延伸PCR(SOE PCR)技术构建转录因子EB(TFEB)丝氨酸114位点突变体原核表达质粒,并进行体外诱导表达和纯化.方法:根据SOE PCR技术原理设计突变引物,以pGEX-6p-1-TFEB质粒为模板,分别采用外侧引物...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 赵更香 袁彩 等 《生物化学与生物物理进展》 2006年33卷4期 377-381页SCIISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 利用重叠延伸PCR方法扩增尿激酶催化结构域的突变体基因片段,将其克隆至表达载体pPICZαA上,转化酵母X-33,用Zeocin筛选高拷贝数的酵母菌落.重组蛋白通过阳离子琼脂糖柱纯化,纯度达到99%,该仅含尿激酶催化结构域的突变体(C279...
【关键词】 尿激酶；Pichia pastoris；纤溶酶原；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 何颖 夏星雅 等 《中国药科大学学报》 2021年52卷2期 236-244页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 采用重叠PCR(overlap PCR)方法构建了 pdr5与snq2基因敲除组件,研究了 pdr5、snq2基因突变对酵母细胞传感器评估遗传毒性的影响.考察了野生型、pdr5单基因突变、ssnq2单基因突变与pdr5、snq2双基因突变酵...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 白向阳 吕安国 等 《生物化学与生物物理进展》 2004年31卷2期 181-184页SCIISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的PCR产物克隆于T载体上,经转化JM109感受态菌株后,随机挑取8个白斑菌落,混合后制成混合模板.采用3条引物,做两轮重叠PCR反应,获得了...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 刘璨 姚亭秀 《生物学通报》 2022年57卷6期 46-50页ISTICCA
【摘要】 PCR技术是现代分子生物学研究中最常用的技术,自1986年发明至今,在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多新PCR技术,本文对5种常用PCR技术进行简介.
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 戴晓燕 于静娟 等 《植物学报》 2004年46卷4期 497-504页SCIMEDLINEISTICCSCDCABP
【摘要】 通过差异筛选法并结合冷噬菌斑筛选,从玉米(Zea mays L.)成熟花粉cDNA文库中克隆到一个玉米花粉特异表达的cDNA片段ZM401(663bp).Northern杂交表明ZM401是一个玉米花粉特异表达的基因.本文采用5'RACE,...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 何聪芬 小松田隆夫 《遗传学报》 2004年31卷11期 1262-1267页SCIMEDLINEISTICCSCDCABP
【摘要】 建立了一种用PCR方法筛选富含高度重复序列的大麦BAC DNA 文库和直接对 BAC DNA进行末端测序的方法.用PCR技术进行大麦BAC DNA 文库(含816个平板,每个平板含384个克隆)的筛选分4步进行.在实验中,建立了两个水平的B...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 侯理理 蒋俶 等 《实验生物学报》 2004年37卷2期 133-138页SCIMEDLINEISTICCSCDBP
【摘要】 为了研究在昆虫细胞中表达重组人卵泡刺激素,我们以人胎盘组织提取的染色体DNA为模板,利用重叠PCR方法扩增出hFSHβ亚基的cDNA的编码区.将此cDNA克隆入核型多角体病毒(AcNPV)非融合蛋白基因表达载体pVLl393,我们得到了表达...
【关键词】 表达 重叠PCR hFSH 重组病毒 昆虫细胞SF9；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 路晓红 付玉荣 等 《重庆医科大学学报》 2017年42卷2期 185-190页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:制备重组小鼠白细胞介素-27 (interleukin-27,IL-27)融合蛋白的多克隆抗体并鉴定其活性.方法:用反转录PCR从小鼠脾细胞扩增出EB病毒诱导基因3(EBI3)和p28成熟肽基因片段,采用重叠延伸PCR用(Gly4Se...
【关键词】 小鼠白细胞介素-27；重叠延伸PCR；融合蛋白；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 刘鑫 良雪 等 《实用医学杂志》 2016年32卷16期 2621-2624页ISTICPKUCA
【摘要】 目的：BCR-ABL SH3结构域双位点突变体构建，探讨其促进CML细胞株凋亡机制，为CML治疗奠定基础。方法：采用重叠延伸PCR 扩增双突变体，构建含ABL SH3双突变基因的重组腺病毒载体，流式细胞术分析突变体对KCL22细胞凋亡的影响...
【关键词】 BCR-ABL融合蛋白；重叠延伸PCR；KCL22细胞；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 曹文萍 苑海刚 等 《眼科新进展》 2015年35卷6期 525-528页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系,为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供实验基础.方法 应用重叠延伸PCR法定点诱变,构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 郭敏 雷清 等 《中国新药杂志》 2015年24卷3期 271-275,302页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:将胞内表达载体pAO815改建成分泌型表达载体,并体外构建戊型肝炎病毒ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,进一步比较不同转化子在毕赤酵母中的表达水平,以得到高表达重组菌株.方法:利用重叠PCR技术将α-factor信号肽基因与目...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 曹文萍 苑海刚 等 《眼科新进展》 2015年35卷6期 525-528页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系,为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供实验基础.方法 应用重叠延伸PCR法定点诱变,构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 田平雅 吕苗苗 等 《黑龙江农业科学》 2021年1期 5-10页
【摘要】 在功能基因组学时代,对基因的功能研究将涉及到大量的载体构建,为建立一种链霉菌外源基因多拷贝表达的载体构建方法,本研究采用重叠延伸PCR与双酶切结合的连接方法,构建链霉菌表达载体,以红霉素工业生产菌红色糖多孢菌(Saccharopolyspo...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 鲁战胜 郭丽丽 等 《中国肺癌杂志》 2014年3期 183-188页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 背景与目的已有的研究证明nm23-H1基因是一个重要的肿瘤转移抑制基因，但其抑制肿瘤转移的生化机理尚不完全清楚。Nm23-H1基因结构和功能异常与肿瘤的侵袭转移有密切关系。我们前期已构建了nm23-H1的短发夹RNA（short hairp...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 郑雨桐 闫美田 等 《临床检验杂志》 2020年38卷12期 881-885页ISTICCA
【摘要】 目的 采用2种重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将5种立克次体目的 基因片段进行融合,同时对2种方法 进行比较.方法 采用一步法及两步法融合基因技术,对5种立克次体融合基因进行构建,并优化一步法中重叠引物浓度以及两步法中各靶基因产物加入量...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 陈尚良 刘正婷 等 《检验医学与临床》 2020年17卷12期 1659-1661,1665页ISTICCA
【摘要】 目的 构建3种常见的CD36基因突变质粒,为建立高分辨率熔解曲线方法 提供突变标准品.方法 选取广州人群常见的CD36基因突变位点A1237C、C268T及329-330delAC作为研究位点,采用重叠延伸PCR方法 及TA克隆技术构建含有...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 赵志英 朱宏谦 等 《中国药理学通报》 2013年29卷5期 733-736页ISTICPKUCSCDCABP
【摘要】 目的 构建Kir2.1/ Kir2.3通道嵌合体,为进一步研究Kir2.1和Kir2.3通道的调控机制打下基础.方法 利用重叠延伸PCR方法构建不同的Kir2.1/ Kir2.3嵌合体质粒:N1P3C3,N3P1C1,N3P3C1,N1P1...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 赵炜 崔红晶 等 《海南医学院学报》 2012年18卷10期 1349-1352,1356页ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建人类KAP-1基因定点突变载体,为研究该基因的功能奠定基础.方法:综合运用PCR重叠延伸法和分段定向克隆技术.结果:DNA测序结果表明定点突变载体构建成功.结论:成功构建高GC含量(局部高达80.50％),全长为2 500 bp的...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 赵秀芹 夏强 等 《中国人兽共患病学报》 2012年28卷12期 1167-1172页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将串取亲和纯化(TAP)标签敲入耻垢分枝杆菌基因组.方法 从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5'端非编...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 张毅 周淑艳 等 《生物技术通报》 2012年3期 173-178页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 利用重叠延伸PCR技术扩增EB病毒BZLF1N-BLRF2融合基因,构建原核表达载体pGEX-4T-1-BZLF1 N-BLRF2,并进行了蛋白的诱导表达.通过序列测定和ORF软件分析,该融合基因含有1个1005bp的ORF,编码335个氨...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 张超 刘国炳 等 《南方医科大学学报》 2011年9期 1513-1517页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 应用降落和重叠延伸PCR法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒载体，观察其对CD133+人大肠癌细胞株SW480的感染效率。方法利用重叠延伸PCR技术扩增5型腺病毒纤毛球端HI环两端的基因序列，定向插入真核表达质粒...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 雷小春 刘田福 等 《中国比较医学杂志》 2011年21卷1期 48-53页ISTICPKUCA
【摘要】 目的 克隆甘丙肽重构基因GAL(intronⅡ),构建小鼠神经系统特异性表达甘丙肽(galanin,GAL)的转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),为制备GAL转基因小鼠做准备.方法 通过常规PCR...
【关键词】 甘丙肽；重叠延伸PCR；血小板源性生长因子启动子；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 邹娴 张茂 等 《生物技术通报》 2011年8期 192-197页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 通过RT-PCR方法,从黑曲霉总RNA中克隆出β-甘露聚糖酶基因manA的成熟肤编码序列.将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肤序列通过重叠延伸PCR方法得到拼接片段,并插入到真核表达...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 张念章 储岳峰 等 《生物技术通报》 2011年7期 186-190页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 利用重叠PCR法构建了包含副猪嗜血杆菌血清5型hhdA基因上、下游同源臂(H-up、H-down)和卡那霉素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown.通过对反应条件进行优化,发现退火温度为50.5℃,加入H-up、H-do...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 赵丽丽 夏强 等 《中国人兽共患病学报》 2011年27卷6期 539-542,546页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组.方法 将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,使其表达重组蛋白,制备带有重组蛋白的感受态细胞;从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hy...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 芦春斌 高忱 《生物技术通报》 2011年4期 143-146页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 HPV16型为主的多种HPV病毒可诱发机体发生宫颈癌等疾病,以重叠PCR法人工合成HPV16 E6、E7致癌基因的融合基因,以之为目的基因构建了无选择标记基因(Marker-Free)双元载体,期望转化番茄开发新型宫颈癌治疗性疫苗-转基因植...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 张强 丰锋 等 《中国人兽共患病学报》 2010年26卷4期 299-303页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 构建mBD1与M2e融合基因的真核表达载体,并检测其在MDCK细胞中的表达情况,初步探讨其免疫特性.方法 利用PCR方法分别扩增mBD1与M2e基因片段,再通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD1与M2e通过一段多肽接头Gl...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 年四季 黄黎 等 《中国免疫学杂志》 2010年26卷6期 544-547页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的:构建人源性天然噬菌体展示文库并对文库进行鉴定.方法:从未经主动免疫健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA,用直接PCR及半巢式PCR扩增人抗体重链(VH)及轻链(Vκ和Vλ)可变区基因.采用改进的重叠延伸PCR法...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 芦春斌 马贞丽 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 2010年31卷6期 544-549页ISTICPKUCA
【摘要】 目的:利用重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因的全长序列.方法:对风疹E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠PCR法分别合成该基因的3个片段,测序鉴定后以酶切连接法将各...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 黄丹 潘善培 等 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 2010年31卷2期 130-135页ISTICPKUCA
【摘要】 目的:构建重组人Catsper1特异抗原(含胞外区、钙选择孔区和破伤风类毒素通用T细胞表位TT580-590)原核表达载体并表达重组抗原.方法:设计引物,以RT-PCR法扩增人CatSper1的整个跨膜区DNA片段,利用重叠PCR方法合成重...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 雷小春 司苏晋 等 《生物技术通报》 2010年4期 156-160页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 构建嵌入第二内含子的甘丙肽(Galanin,GAL)全长基因组cDNA的重构分子.通过RT-PCR扩增出cDNA编区的序列,分别从基因组中扩增出cDNA的5'和3'端部分非编码序列;使用重叠延伸PCR(overlap extention P...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 蔡杰 杨成龙 等 《基因组学与应用生物学》 2010年29卷4期 804-808页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 本研究通过PCR方法从拟南芥基因组序列中分离了3个理论推断与耐寒相关的miRNA片段(miRNA402,miRNA319和miRNA393)和1个与植物生长相关的片段miRNA172.利用重叠延伸PCR技术将miRNA172小分子,以及3个...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 杨细媚 文阳安 等 《生物技术通报》 2009年1期 76-79页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 天蚕素A(Cecropin A,CA)是来源于惜古比天蚕(Hyalophoracecropia)的含有37个氨基酸的抗菌肽,在非极性环境中形成α螺旋型结构,具有抗菌活性强、抗菌谱广等特点.为降低天蚕素A对宿主的毒性及提高其表达丰度和稳定性,...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 魏明敏 邱德文 等 《生物技术通报》 2009年4期 91-94,102页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 构建嗜线虫致病杆菌Xna基因的同源重组载体和建立该细菌的遗传转化体系.扩增嗜线虫致病杆菌XNA基因的左右同源片段及质粒PEASY-T1上的卡那抗性基因Km;利用重叠延伸引物PCR法将这3个片段连接起来,然后将其克隆至自杀性载体PJQ200....
【关键词】 嗜线虫致病杆菌；同源重组载体；重叠延伸引物PCR法；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 王文敬 黎诚耀 等 《南方医科大学学报》 2009年29卷8期 1548-1550页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 将重组的乙肝表面抗原(pcHBsAg)中多个CTL表位,用外源性的磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白(GPC3)CTL表位序列替换,构建单拷贝和多拷贝DNA疫苗,获得不同位点的单拷贝或可同时表达多个CTL表位肽的真核表达质粒.以pcHBsAg质粒为...
【关键词】 表面抗原；表位替换；磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白；
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 曹莹 王卫国 等 《南方医科大学学报》 2009年29卷4期 652-655页MEDLINEISTICPKUCSCDCA
【摘要】 目的 对人端粒酶RNA进行多位点的突变并构建该突变体的酵母三杂交诱饵质粒,且进行毒性检测.方法 根据人端粒酶RNA(hTR)序列及突,变位点设计引物,运用重叠延伸PCR法埘hTR基因的第41位、第80位及第102位碱基进行T→A突变,将突变...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
【中文期刊】 冉丹霞 王荣荣 等 《生物技术通报》 2009年8期 118-119,124页ISTICPKUCSCDCA
【摘要】 用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得轮状病毒VP4基因.根据Genbank中鼠VP4基因的序列设计34对引物,用overlap PCR法合成VP4全基因的两个片段A、B,将A、B分别连入pMD19-T sim...
- 概要：
- 方法：
- 结论：
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